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猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的一种高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列入OIE疾病名录(OIE Listed diseases)。CSFV跟同属的牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)、绵羊边界病病毒(BDV)和长颈鹿瘟病毒(Giraffe pestivirus)都是黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的成员。E2囊膜糖蛋白是猪瘟病毒的主要结构蛋白,能诱导机体产生中和抗体,是近年来研制新型疫苗和血清学诊断抗原及CSFV抗原变异的主要对象。疫苗接种和血清学检测是控制和消灭猪瘟的关键,而免疫接种的制定又依赖于血清学检测,因此,猪瘟抗体检测极为重要。中和抗体是免疫保护的重要组成部分,是评价疫苗免疫效力的重要参数。通常采用NPLA方法来检测猪瘟中和抗体,但该方法需要复杂的技术和设备,操作费时费力,十分不利于现地应用。因此建立一种简单易行的猪瘟中和抗体检测方法是十分必要的。本研究旨在用重组杆状病毒表达的猪瘟病毒重组E2蛋白作为ELISA包被抗原,用辣根过氧化物酶标记的E2蛋白中和性单克隆抗体作为竞争抗体,建立并优化了一种用于检测CSFV中和抗体的重组E2蛋白竞争抑制ELISA方法(Competitive Inhibition ELISA,CI-ELISA),用于检测猪瘟病毒中和抗体。经筛选确定,CI-ELISA的抗原包被浓度为3μg/mL,酶标竞争抗体的最佳稀释度为1:4000,阴性血清抗体阻断率临界值为33%,阳性血清抗体阻断率临界值为40%。CI-ELISA与其他主要病毒的阳性血清均无交叉反应。用本方法和阻断ELISA试剂盒方法同时对采自我国几个省份的370份现地血清进行CI-ELISA检测,两者的符合率为96.7%。本研究建立的CSFV CI-ELISA诊断方法,为我国猪瘟的诊断、疫苗免疫水平监测、流行病学调查、进出口检疫等提供了一种简单的、快速的、价格低廉的血清学诊断方法,为进一步开发商品化诊断试剂盒奠定了基础。