大豆转基因技术体系的建立及大豆蛋白激酶(GmPK)基因的导入的研究

来源 :宁夏大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:acidliu1
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大豆(Glycine max(L.) Merr.)是一种重要的油料和饲料作物,也是人类的主要食用蛋白和工业原料的来源。遗传转化不仅可以是研究基因功能,也是将优良外源基因导入大豆中培育大豆新品种的主要方法。与其他作物相比,大豆是较难转化的作物,主要体现在转化效率低、转化后植株再生频率低及重复性差等方面,因此建立理想、高效的大豆转化体系,是目前研究热点之一。   目前有多种植物遗传转化的方法,其中根癌农杆菌介导的子叶节法是国内外植物基因工程中较为常用的方法之一,本研究以大豆品种“中黄10”、“中豆32”、“Peking”的成熟种子为材料,用携带有抗旱、耐盐目的基因GmPK(pBI121/pEGAD)的农杆菌EHA105侵染外植体,对农杆菌介导转化大豆的影响因素进行研究,同时从培养基改进等方面对遗传转化体系进行优化,以提高农杆菌的侵染率、丛生芽的诱导率等,建立一种稳定性好、通用性强的大豆转化技术体系,达到将目的基因导入大豆,获得转基因植株,提高转化效率的目的。   获得的主要结果如下:   1.大豆子叶节高再生力基因型的筛选。用含不同质粒(pBI121/pEGAD)的同一农杆菌菌株EHA105浸染13个不同基因型大豆的子叶节,不同基因型之间再生频率有明显差异,它们的再生频率变幅分别为0-51%和0-51.9%,从中筛选出中黄10、中豆32、Peking三个再生频率较高的基因型。   2.葡萄糖浓度对农杆菌侵染效率的影响。通过葡萄糖浓度(5 g/L、10 g/L、15 g/L)的梯度实验,发现向共培养培养基中加入10 g/L的葡萄糖可以有效促进农杆菌对外植体的侵染,用GUS化学组织染色检测,结果表明农杆菌侵染效率平均达76.7%。   3.不同浓度维生素C对不同基因型抑制褐变的效果。在诱导丛生芽阶段,通过浓度梯度实验发现在培养基中针对不同基因型加入适宜浓度的Vc(中黄10:25 mg/L,Peking:50 mg/L,中豆32:100 mg/L),可有效防止外植体褐化,阻止细胞死亡。   4.不同激素的配比对丛芽苗生根的影响。结果表明1/2MS培养基+IBA(1.5 mg/L)能提高再生苗的生根率,同时可缩短再生苗生根的开始时间。   5.转基因再生植株分子检测。对已获得的再生植株进行检测,结果获得7株转基因阳性植株,初步证明GmPK目的基因已整合到大豆基因组中。
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