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1．目的 Th1和Th2型细胞因子在慢性炎性自身免疫性疾病中发挥不同的作用。研究表明各种炎性关节病如类风湿关节炎(RA)、反应性关节炎(ReA)的发生、发展与Th1／Th2的失衡有关，但关于Th1／Th2细胞因子在强直性脊柱炎(AS)发病中的作用却少见报道。本研究拟通过建立细胞内细胞因子染色、三色流式细胞分析术，从单个细胞水平检测AS患者外周血中CD4’和CD8’T淋巴细胞分泌干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)的情况，同时测定血清IFN-γ和IL-4的含量以及外周血单个核细胞(PBMC)IFN-γ和IL-4 mRNA的表达水平，探讨Th1／Th2细胞因子与AS发病的关系。另外，已有的研究发现，各种DMARD在治疗RA的过程中均对Th1／Th2分化有一定的影响。本研究通过检测RA患者在应用免疫抑制剂来氟米特治疗前后外周血中Th1／Th2细胞的变化情况，探导来氟米特在治疗RA时对Th1／Th2分化的影响。 2．方法 建立细胞内细胞因子染色、流式细胞分析方法。采用佛波醇酯(PMA)、离子霉素(ionomycin)和莫能霉素(monensin)联合刺激外周全血细胞；经红细胞裂解液去除红细胞后以多聚甲醛固定细胞、皂甙使细胞膜的通透性增加；荧光标记的抗细胞因子 和细胞表面抗原的单克隆抗体进行染色。应用流式细胞仪对淋 巴细胞的细胞内细胞因子（FN叶、IL－4）和表面抗原（CD4”、CDS＋） 进行分析。 收集39位AS患者的外周血和临床资料。采用细胞内细胞 因子染色、三色流式细胞分析法检测AS患者外周血CD4＼CDS“ 细胞分泌IL叶和IFN叶的情况。收集并分离上述患者的PBMC， 应用半定量 RT－P C R法测定 IF N叶和 IL－4 m RN A表达水平，以 三磷酸甘油醛脱氢酶（G3PDH）作为内参照，扩增产物经琼脂糖 凝胶电泳、通过测定积分光密度值计算mRNA相对表达量。采 用双抗体夹心酶联兔疫吸附法测定患者血清中IFN叶 和IL4 的水平。 收集 2 5位 RA患者和 10例接受来氟米特治疗前及治疗 3 个月后的RA 患者的外周血，采用细胞内细胞因子染色、三色 流式细胞分析法对 CD4”、CDS”细胞分④IL－4和 uN叶的情＆ 进行检测。 3．结果 AS患者外周血ThllTbZ分化特点 在AS患者和健康对照 的外周血中，TN 和 h l 型细胞比 ThZ和 TCZ型细胞多o均 ＜0．01），其中IL－4主要山 ＊hZ细胞产生汗＜0．01），而＊hi细胞 分泌的IFN叶要比TCI细胞多门＜0．of卜AS患者外周血中Thl、 ThZ、Tol和 TcZ细胞与对照组相比并无显著增多或减少。患者 的 Th或 TC 型细胞百分数与炎症指标仲 血沉）呈中度负相关 （P－0．of卜同正常人相比，AS患者血清 IFN1水平和 IFN叶／IL4 的比值明显升高，而IL．4水平无显著变化。AS患者PBMC中 IFN叶和 IL－4 mRNA 表达水平均较健康对照明显升高，同时 IFN1／IL4比值也较对照组升高＊FN个和 IL4 mRNA表达水平 与C－反应蛋白呈中度负相关o＜o．05卜 ．4． 来氟米特对RA患者外周血Thl汀出2分化的影响 同健康 对照组相比，RA 患者外周血中 Th 型细胞明显减少，患者的 Thl、ThZ、TCI 和TCZ细胞百分数与炎症活动指标无明显相关 性。在应用来氟米特治疗3个月后，随着病情的明显好转，10 例RA患者外周血中Thl、ThZ和h 细胞（TCZ细胞除外）百分 数均明显减少（均P＜o．05＊＊hi的下降幅度大于＊hZ，但无统计 学意义（p＞0．05）。 4．结论 AS患者外周血中的Thl／ThZ细胞因子类型向Thl型偏移； 而随着炎症指标的升高，Thl细胞的活性呈现下调趋势。AS的 诱发因素可能促发了机体 Th细胞为主导地位的免疫反应、Th 型细胞因子IFN叶生成增多，而IFN个又介导了一系列炎症介质 的生成、促进了AS的炎症反应。 来氟米特可能通过抑制 Th 型和 TC 型的分化、减少 Thl／TGI型细胞因子如 IFN叶的分泌而发挥抗炎及改变RA病程 的作用。