【摘 要】
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微生物多样性是生物评价的重要指标之一。应用分子生物学的研究方法可以快速准确地获得微生物多样性信息。本论文在末端限制性片段长度多态性分析(T-RFLP)方法的基础上,建立
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微生物多样性是生物评价的重要指标之一。应用分子生物学的研究方法可以快速准确地获得微生物多样性信息。本论文在末端限制性片段长度多态性分析(T-RFLP)方法的基础上,建立了双荧光标记的T-RFLP技术,并将其应用于大凌河地区11个底泥样品的分析中,从而对大凌河流域的环境状况做出了初步的生物评价。
论文首先对双荧光T-RFLP技术检测的准确性及灵敏性进行了分析,结果表明,与传统T-RFLP基本一致或优于。进一步优化了分析参数的设置,使双荧光T-RFLP检测的灵敏度达到样品中某菌群的数量大于50时即可被有效检出。
应用双荧光标记T-RFLP技术对辽宁省大凌河区域的11个底泥样品进行了分析,获得如下结果:
1.Jaccard相似性指数分析表明,D4(排污口附近)样点与大凌河上游(D1-D3)样点相比,对下游各样点(D5-D9)的微生物群落组成影响更大。另外枯水期(2011年5月)与丰水期(2010年8月)相比,地理位置接近的样点具有更高的相似性。
2.对Shannon-Wiener多样性指数、Evenness均匀度指数、Simpson多样性指数和Patrick丰富度指数的综合分析表明,大凌河11个采样点的底泥样品多样性指数均大于2,均匀度指数均大于0.9,细菌丰富度较高,且物种多样性相对稳定。
3.主成分PCA分析表明,环境因子中溶氧值(DO)及pH值对大凌河流域底泥样品微生物多样性指数的影响最大。
4.对大凌河流域11个底泥样品的优势菌种分析表明,普遍存在的菌种为芽孢杆菌属(Bacillus)及梭菌属(Clostridium);而在排污口附近样点,优势菌种多为与硫氧化还原反应相关的菌属,如脱硫弧菌属(Desulfovibrio)、产碱杆菌属(Alcaligenes)和硫杆菌属(Acidithiobacillus)等。
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