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己烯雌酚是一种人工合成的雌性激素,因其价廉效优,被广泛用于临床医学和畜牧养殖业。国内外广泛的科学研究证明己烯雌酚对人类和动物的生殖系统、免疫系统有一定的毒性,有生殖系统致癌性,且对生态环境具有强大的潜在危害,己烯雌酚的毒副作用对人类及其生存环境形成了巨大威胁,这就促使很多国家陆续出台法令禁止其使用。己烯雌酚检测方法的研究在世界各国迅猛发展,GC-MS和LC-MS是检测己烯雌酚残留的标准方法,方法准确度高,但是此类方法检测仪器昂贵、样品前处理复杂、需专业人才操作、不易普及。而荧光定量免疫层析法检测的基础是免疫反应,该类检测方法具有快速、灵敏、操作简便、成本低等诸多优点,有着广阔的发展前景。本研究旨在建立一种己烯雌酚的竞争性荧光定量免疫层析法,并针对己烯雌酚残留检测研制出一款快速高效小巧的检测试剂盒。实验首先设计合成了两种己烯雌酚半抗原(DES-HS和DES-MCME),并通过元素分析法和质谱分析法进行联合鉴定,运用碳二亚胺法和混合酸酐法将两种半抗原与BSA进行偶联,紫外分析表明成功合成了DES-HS-BSA和DES-MCME-BSA两种完全抗原。运用ELISA和荧光定量免疫层析双平台对合成和购买的抗原抗体进行配对筛选,最终筛选出一对适用于荧光定量免疫检测的包被原B2和抗体A1。实验对荧光定量免疫层析平台进行了条件优化,结果表明:试纸条最佳工艺条件为荧光胶乳标记抗体浓度0.2 mg/mL,检测线抗原包被浓度2.0 mg/m L,荧光标记抗体的稀释参数1:100,荧光胶乳标记抗体溶液与待测样液的加样比例1:1,包被膜干燥时间36 h,层析反应时间15min。在0μg/L、2μg/L、4μg/L、8μg/L、16μg/L这五个DES浓度点建立的标准曲线线性良好,R2=0.9998。实验对试剂盒性能进行评估,结果表明:试剂盒对猪尿样本的检测限和定量限分别为0.4684μg/L和1.4316μg/L,添加回收率在95.1%~97.2%之间,批内、批间精密度均符合要求,试纸条的特异性和稳定性都较好。实验探讨了不同的己烯雌酚残留样本(猪肉、鱼肉、饲料和牛奶样本)的前处理方法,不同状态和基质的样本经过不同方式的前处理后,用己烯雌酚试剂盒进行检测,结果表明:四种样本的加标回收率分别为91.50%、93.25%、91.07%和90.39%,符合检测要求,样本前处理方法有效,可以在类似基质样品中沿用。