间充质干细胞(MSCs)源于中胚层的多能干细胞,常从骨髓中分离得到,具有贴壁、自我更新、在体内外能向所有中胚层来源的细胞和部分外胚层细胞(如肌肉细胞、神经元和上皮细胞)分化的特点,且可通过旁分泌作用释放一些生长因子或细胞因子促进内源性血管新生。血管生成过程一般包括血管内皮基质降解、内皮细胞增殖和迁移及与血管平滑肌细胞和细胞外基质等组分形成血管环和新的基底膜等;其中α-SMA和VEGF分别是血管平滑肌细胞和血管内皮细胞的特异性标记基因,CD31作为黏附分子,常存在于内皮细胞间紧密连接处,可通过激活整合素等方式介导内皮细胞之间的连结,促进内皮细胞迁移;VEGF、CD31和α-SMA三个特异性标记基因的时序表达反映血管生成的整个过程。本研究确立了VEGF基因启动子调控报告基因荧光素酶(Luc)的体外药物筛选细胞模型的阳性对照为辛伐他汀;在体外对从治疗脑缺血和促进血管新生效果显著的三个藏药(如意珍宝丸、二十味沉香丸和二十五味珊瑚丸)中的10个药物单体化合物进行体外安全性评价,选择10μM作为药物进一步筛选的最大浓度;通过测定不同浓度的10个药物单体化合物对VEGF启动子调控报告基因Luc转录表达相对荧光素酶活性的影响,发现土木香内酯、西红花苷II、木香烃内酯和芒果苷4个单体化合物均能明显上调VEGF启动子调控报告基因Luc的转录表达,表明4个单体化合物能够促进VEGF启动子调控的细胞内特异性基因表达也同步上调,进而表明4个单体化合物有诱导rMSCs向该特异性基因所代表的细胞类型进行分化的潜能。对于初筛为阳性的4个单体化合物,体外探索其诱导大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)表达血管标记分子情况;基因水平检测发现4个单体化合物均能不同程度地促进rMSCs转录合成α-SMA、VEGF和CD31基因的mRNA,其中VEGF和CD31在2天时m RNA的相对表达量较高,α-SMA则在4天时mRNA的相对表达量较高,三个基因表达的时序性与血管生成一般过程相紊合;免疫荧光原位检测rMSCs表达α-SMA、VEGF和CD31蛋白情况,结果表明4个化合物均能极显著地增加rMSCs原位表达VEGF蛋白(**P≦0.01),且不同程度地增加CD31和α-SMA蛋白的表达;此结果验证了rMSCs有向该特异性基因所代表的细胞类型进行分化的潜能,同时也说明4个单体化合物在一定程度上能够促进血管新生的发生。本研究中从启动子调控报告基因(Luc)转录表达荧光素酶活性、基因和蛋白表达水平对土木香内酯、西红花苷Ⅱ、木香烃内酯和芒果苷4个单体化合物进行筛选和验证,不仅为更多药物的快速筛选和定量判断药效提供方法,还验证了rMSCs向血管方向分化的潜能,为rMSCs向血管表型转化和药物促进血管新生等研究提供了理论依据。