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雄性中华鳖生殖方式特殊,精子在睾丸中发生并一次性排放到附睾中,需要精子在附睾中储存相当长一段时间。影响精子储存的因素有很多,免疫调节是其中的一个重要因素。外来微生物的感染,能降低精子的数量、质量,从而影响精子在附睾中的储存,并影响受精能力。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是一类重要的介导先天性免疫反应的分子,主要参与机体的先天性免疫识别,还可以启动特异性免疫,是连接先天性免疫和特异性免疫应答的桥梁。本文主要是通过研究TLR2/4在中华鳖精子及附睾中的表达与分布,从而在分子水平去阐述TLR2/4与中华鳖精子储存的关系,以期从免疫学角度探究中华鳖精子储存的机制。1 TLR2/4在中华鳖精子中的表达与分布应用普通PCR方法检测TLR2/4 mRNA在精子中的表达情况;Western Blot的方法检测TLR2/4蛋白在冬眠期与繁殖期中的表达差异;免疫荧光(I.F)的方法检测TLR2/4在繁殖期与冬眠期精子中的分布特点。结果显示,TLR2/4mRNA及蛋白在冬眠期与繁殖期中华鳖精子中均有表达,并且TLR2蛋白在冬眠期精子中的表达显著高于繁殖期,但TLR2与TLR4在冬眠期与繁殖期精子中的分布位置差异不大,均分布在精子顶体以后的头部及中段。这一结果表明,TLR2/4可能会保护精子免受感染,从而影响精子在附睾中的储存。2 TLR2/4在中华鳖附睾中的表达与分布应用Western Blot的方法检测冬眠期与繁殖期附睾头、体、尾中TLR2/4蛋白的表达情况,进一步应用免疫组织化学(IHC)的方法检测TLR2/4在冬眠期与繁殖期附睾头、体、尾中的分布特点。结果显示,TLR2/4蛋白在中华鳖附睾头、体、尾均有表达,就附睾头部、体部、尾部各段TLR2/4的表达差异而言,TLR2的表达差异均不显著,TLR4在冬眠期与繁殖期附睾尾部的表达均显著高于头部与体部;就冬眠期、繁殖期不同时间段TLR2与TLR4的表达差异而言,差异均不显著。TLR2、TLR4在冬眠期与繁殖期附睾中的分布位置差异不大,都主要分布在附睾管上皮,并且输出小管也呈阳性,附睾管腔中可见阳性精子。结果表明,TLR2/4均表达于储存微环境-附睾,从而影响精子在附睾中的储存。