洋葱,百合科葱属蔬菜作物,是世界第四大的蔬菜作物,在我国广为栽培。洋葱栽培已有5000多年的历史,可谓历史悠久。由于洋葱是二、三年生异花授粉、异质性强、花器结构小、单株结籽少、自交2-3代后易发生退化、甚至失去育性等客观因素的存在,导致常规育种上一直存在育种周期长,育种效率低等问题,因而目前在我国洋葱生产上使用的品种大多数为国外品种,国内育成品种却是廖廖无几。而原生质体不仅可以进行病毒侵染机理等基础研究,还是遗传转化的理想受体,且原生质体融合还可以克服不同物种细胞间的不亲和障碍,为实现远源物种间的体细胞杂交、培育新种开辟了新的途径。本研究探讨了不同的外植体获得的洋葱再生体系的建立,利用获得的胚性愈伤组织作为材料进行原生质体分离,得到高产量的原生质体,探讨了原生质体分离培养的影响因素,旨在建立洋葱原生质体的再生培养体系,为以后导入一些优良的目的基因及原生质体融合等遗传操作,最终创造优良的种质资源奠定基础。本研究的主要结果如下：1、建立了洋葱无菌苗鳞茎盘再生体系：愈伤诱导最佳培养基为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA1.0mg/L,出愈率都在90%以上；芽分化最佳培养基为NAA0.5mg/L+6-BA 1.Omg/L,芽分化率为81.67%。2、建立了洋葱花蕾再生培养体系：愈伤最佳诱导培养基为MS+2,4-D2mg/L+6-BA4mg/L,花蕾出愈率38.33%,平均愈伤率63.83%,直接芽诱导率为3%,均为各组合最高值；芽分化最佳培养基为6-BA 2.0mg/L+NAA 1.Omg/L,诱导率可得77.88%。3、选用甘露醇为渗透压稳定剂,确定了洋葱愈伤的渗透压为0.6mol/L。4、建立了洋葱愈伤原生质体快速分离体系：(1)以愈伤组织为游离材料的的最佳酶液组合为0.6M甘露醇+0.1%MES+2.0% Cellulase Onozuka R-10+0.1%PectolyaseY-23+0.5%Macerozyme R-10,溶于CPW溶液中,pH为5.8,在25℃黑暗条件下,酶解5-6h为最佳。筛选条件时,离心600转/min,培养12d的愈伤材料为最佳条件。(2)原生质体培养初步研究发现：洋葱悬愈伤分离得到的原生质体,采用固液双层培养法和液体浅层培养法,在培养密度为1×105个/mL时,在MS+1 mg/L 6-BA+1 mg/L NAA+O.1％水解酪蛋白+0.2mol/L葡萄糖+0.2mol/L蔗糖+0.6mol/L甘露醇,培养基上观察到长壁的原生质体,只有观察到第一次分裂,以后就没有更进一步的发现。