艾滋病,即获得性免疫缺陷综合征,是当前威胁人类生命健康与全球公共卫生安全的最大问题,也被称为“超级癌症”和“世纪杀手”。人类免疫缺陷病毒(HIV)是其主要病原体。它在分类学上属于反转录病毒科、慢病毒属、灵长类慢病毒群。HIV是一种能攻击人体免疫系统的病毒。它把人体免疫系统中最重要的T4淋巴细胞作为攻击目标,大量破坏T4淋巴细胞,导致淋巴细胞的大量衰竭。HIV本身并不会引发任何疾病,而是当免疫系统被HIV破坏后,人体由于抵抗能力过低,导致各种机会性感染或肿瘤而造成死亡。虽然全世界众多优秀的医学研究人员付出了巨大的努力,但至今尚未研制出根治艾滋病的特效药物,也没有研究出用于预防的有效疫苗。目前,该病病死率几乎高达100%；已被我国列入乙类法定传染病,并被列为国境卫生监测传染病之一。而制约抗艾滋特效药物及治疗性疫苗进一步发展的原因之一,是缺少简便有效的测试模型来评价其效果。用细胞作为模型进行检测,由于避免了直接使用毒株或组织所存在的危险性及难于操作等缺点,是目前用来进行临床试验前不可或缺的一个环节。本研究选择慢病毒穿梭质粒载体pLVX,插入HIV-1外膜蛋白基因gp120,以空载体作为阳性对照,结合慢病毒包装质粒载体pLP1(gag/pol)、pLP2(rev)、pLP-VSVG,共转染293T细胞,以期包装出具有单轮感染活性的假型重组慢病毒,用其感染小鼠乳腺癌细胞4T1,外源基因可通过慢病毒整合到靶细胞基因组中。通过荧光挑斑纯化,得到阳性克隆细胞,利用荧光显微镜观察、PCR、RT-PCR、Western Blot、ELISA等方法检测gp120基因的整合、转录、表达以及结合活性。研究结果显示,成功构建表达HIV-1外膜蛋白慢病毒重组质粒pLV-120, RT-PCR、 Western Blot及激光扫描共聚焦显微镜检测,目的蛋白在细胞表面得到良好表达。成功包装出具有单轮感染活性的假型重组慢病毒LV-120和LV-ZsGreen1,病毒粒子外观完整,纤突整齐而致密,病毒滴度较高。感染4T1后经PCR、RT-PCR成功扩增出1596bp的目的条带,表明gp120基因成功整合、转录。荧光显微镜下观察到亮绿色荧光,并且Western Blot检测出120kDa的目的条带,表明GP120蛋白得到良好表达。ELISA检测结果表明,细胞模型与重组导向制剂有良好的结合活性。通过上述研究,利用慢病毒载体系统成功建立了能够准确表达HIV-1外膜蛋白的靶细胞模型,为下一步抗AIDS/HIV治疗性疫苗及基因工程靶向制剂或抗病毒药物的研制提供体外细胞模型、动物模型奠定了基础。