目的随着生活质量的日益提高,人们对健康的期待也越来越高。人们不只把健康目标定位在生病治疗,而是愈加重视对疾病的预防和平日里的养生。所以,人们逐渐意识到要加强自身的免疫体统功能,增强对疾病的抵抗能力,从而使自己远离疾病的痛苦。自然地,具有增强免疫功能的中草药也愈发被重视起来,逐渐被人们所信赖,也正逐渐走向寻常百姓家。本实验探讨用新型四唑盐MTS 比色法在T、B淋巴细胞增殖和NK细胞杀伤活性实验中最佳的实验条件。应用血清药理学方法探讨红景天提取物（RSE）与党参提取物（CPE）提高免疫功能的最佳配伍剂量及其合剂对小鼠免疫功能的影响。并采用苯酚硫酸法及高效液相法测定药材中功能因子的成分含量,更好的说明红景天党参合剂具有提高免疫功能的作用。方法1.采用MTS-PMS法测定脾细胞增殖及NK细胞活性的实验:无菌摘取BALB/c品系小鼠脾脏,制成不同浓度的脾细胞悬液,加入脂多糖（LPS）和刀豆球蛋白A（ConA）刺激小鼠脾淋巴细胞增殖;加入活性最高的对数增长期的小鼠淋巴瘤细胞YAC-1、小鼠肝癌细胞H22细胞作为靶细胞检测NK细胞杀伤活性。移入96孔板中培养,过后加入MTS-PMS试剂在492nm处检测OD值。根据不同细胞浓度与OD值关系曲线确定MTS-PMS法的最适细胞浓度及最佳检测时间。2.体外血清药理学实验:采用3×3析因设计,制备9种不同浓度的CPE和RSE混合含药血清,通过在体外测定T、B淋巴细胞增殖能力和NK细胞杀伤活性,确定CPE和RSE的最佳组合剂量。3.小鼠体内实验:用该组合剂量缩小2.5、5及10倍作为RSE+CPE合剂高、中、低剂量组,进行小鼠体内实验,测T、B淋巴细胞的增殖NK细胞的杀伤能力。采用ELASA方法测定小鼠脾细胞培养上清液中白细胞介素-2、6、10（IL-2、6、10）、干扰素（IFN-γ）及肿瘤坏死因子（TNF-α）的含量。4.小鼠迟发性变态反应试验:采用上述喂养条件喂养小鼠30天,进行迟发性变态反应试验。5.功能因子含量测定实验:采用苯酚硫酸法和高效液相法分别检测党参多糖、红景天苷和酪醇含量,并进行精密度、稳定性、重复性、加样回收率实验。结果1.MTS-PMS法确定的小鼠脾淋巴细胞增殖能力最强的脾细胞浓度为3.2×106个/mL;当靶细胞为YAC-1时,MTS-PMS法确定最佳的NK细胞杀伤活性的脾细胞浓度为8×105个/mL,即效靶比为20:1;当靶细胞为H22细胞时,MTS-PMS法确定最佳的NK细胞杀伤活性的脾细胞浓度为1.6×106个/mL,即效靶比为40:1。加入MTS-PMS后8h的吸光度最大,16h的吸光度与8h无显著差异。2.血清药理学实验结果,与空白组相比,RSE 200mg-kg^-1+CPE 790mg.kg^-1剂量组由ConA、LPS诱导的T、B淋巴细胞增殖能力及NK细胞活性明显升高（P<0.05）。3.小鼠体内实验结果,与环磷酰胺组比较,RSE+CPE合剂中剂量组(RSE 40mg·kg^-1+CPE 158mg.kg^-1)和高剂量组(RSE80mg·kg^-1+CPE 316mg·kg^-1)的脾脏指数明显增高（P<0.05）;与合剂低剂量组(RSE 20mg·kg^-1+CPE 79mg·kg^-1)比较,合剂中剂量组白细胞数明显增高（P<0.05）。与环磷酰胺组比较,合剂高、中和低3个剂量组及阳性药物CVT-200（富含西洋参多糖的免疫增强剂）组ConA、LPS诱导的T、B淋巴细胞增殖能力及NK细胞活性均显著增高（P<0.05）;与CVT-200组、合剂高剂量和低剂量组比较,合剂中剂量组T、B淋巴细胞增殖能力及NK细胞杀伤活性均显著增高（P<0.05）。RS-CPE合剂中剂量组均可提高白细胞介素-2、6、10（IL-2、6、10）、干扰素（IFN-γ）及肿瘤坏死因子（TNF-α）的含量（P<0.05）。4.与空白对照组比较,其余各组的耳肿胀程度均显著降低（P<0.05）。CVT-200组、RS-CPE合剂高、中、低剂量组耳肿胀程度均高于CTX组（P<0.05）。RS-CPE合剂高低剂量组及低剂量组耳肿胀程度均低于CVT-200组。RS-CPE合剂中剂量组耳肿胀程度显著高于RS-CPE合剂高及低剂量组（P<0.05）。5.苯酚硫酸法结果显示,党参多糖的平均含量为26.21mg/g;HPLC测定的红景天苷和党参含量分别为0.484mg/g及1.087mg/g。结论1.MTS-PMS法检测淋巴细胞增殖能力的最佳细胞浓度3.2×106个/mL,加入MTS-PMS后最佳测定时。8h～16h检测NK细胞活性时,因靶细胞种类不同所需效靶比不同。2.红景天和党参合剂体内免疫调节的最佳配伍剂量为RSE-CPE:RSE 40 mg·kg^-1+ CPE 158mg·kg^-1。3.红景天和党参提取物合剂有增强小鼠免疫功能的作用。