猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)自二十世纪六十年代被发现以来,许多国家先后分离到该病毒和检测到其抗体,抗体检出率为50%-80%,其中我国高达80%。该病毒感染能引起以母猪繁殖障碍为主要特征的病毒性传染病,孕前期受到感染时,经胎盘使胚胎或胎儿受到侵袭,引起母猪流产、不孕、胚胎死亡、胎儿崎形及木乃伊化等,同时还可引起仔猪的皮炎和腹泻,给养猪业造成巨大的经济损失。疫苗的开发是有效防范PPV的关键。DNA疫苗是继病原体疫苗、亚单位疫苗之后的第三代疫苗,具有许多的优越性。本试验研究利用设计出的引物扩增PPV VP2主要抗原基因,得到1146bp的基因片段,并推导出382aa氨基酸序列,应用DNAstar软件对氨基酸的抗原表位进行了预测。将该VP2基因克隆到真核表达载体pCDNA3.1(+)中,构建出pCDNA3.1(+)-VP2真核表达重组质粒,同时设计并合成一条93bp的含CpG-ISS的寡核苷酸,将其插入构建的pCDNA3.1(+)-VP2真核表达重组质粒中构建了pCDNA3.1(+)-VP2-CpG。将pCDNA3.1(+)-VP2和pCDNA3.1(+)-VP2-CpG这两种质粒分别转染COS-7细胞,利用免疫荧光技术检测表明,这两种质粒均能在COS-7细胞中表达VP2蛋白。将构建好的重组质粒进行大量提取,以肌肉注射的方法将重组质粒接种于健康的昆明小鼠体内,试验分pCDNA3.1(+)空载体组(100μg/只)、pCDNA3.1(+)-VP2组(100μg/只)、pCDNA3.1(+)-VP2-CpG组(100μg/只)、空白对照组。在0、2、4、5、6周分别采集并分离小鼠血清,用ELISA法检测其中的抗PPV特异性抗体。实验结果显示,小鼠在接种重组质粒pCDNA3.1(+)-VP2和pCDNA3.1(+)-VP2-CpG后,其PPV特异性抗体的检测均为阳性,且pCDNA3.1(+)-VP2-CpG免疫组抗体水平高于pCDNA3.1(+)-VP2组。结果显示,插入CpG免疫刺激序列的DNA疫苗能进一步提高抗体水平,因此将CpG-ISS克隆进质粒中是提高DNA疫苗免疫活性的一条有效途径。这为进一步研制安全、有效的PPVDNA疫苗奠定了基础。