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目的： 本实验主要在细胞水平探讨CD137信号是否通过TRAF6/NF-κB影响C57BL/6J小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子c1(NFATc1)的表达。 方法： C57BL/6J小鼠VSMC采用组织块贴壁法原代培养，免疫荧光染色技术鉴定其纯度;应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CD137、TRAF6及NFATc1 mRNA水平的表达;流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)检测CD137蛋白表达。应用Western blot方法检测TRAF6、NF-κB p65、phospo-NF-κBp65(p-p65)及NFATc1的蛋白表达;应用TRAF6小干扰RNA技术沉默表达TRAF6 mRNA及蛋白，并应用Western blot及RT-qPCR的方法检测沉默效果;MTT比色法检测CD137信号激活后VSMC的增殖情况。 结果： (1)组织块贴壁法能有效制备原代VSMC，且免疫荧光鉴定第三代细胞纯度可达95％以上。 (2)肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）(10ng/ml)可刺激小鼠VSMC细胞表达CD137 mRNA水平在刺激24小时后达到最高峰，并持续至48小时(p＜0.05);流式细胞术显示CD137蛋白表达水平在刺激24h后达高峰。 (3)激动型CD137单克隆抗体(CD137 mAb)刺激VSMC后，细胞浆内磷酸化p65(NF-κB)蛋白开始升高，在90 min时显著升高并可在细胞核内测出p-p65(p＜0.05);同时检测TRAF6 mRNA和蛋白也明显升高(p＜0.05);激动型CD137抗体(10mg/L)刺激VSMC，发现NFATc1 mRNA水平在24小时显著升高(p＜0.05)，同时蛋白水平也显著升高。MTT实验检测显示激动型抗体CD137刺激VSMC24小时，浓度剂量为10mg/L时，VSMC显著增殖(p＜0.05)。 (4)应用转染小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)技术沉默TRAF6基因表达后，再予激动型CD137mAb刺激VSMC发现:TRAF6的mRNA及蛋白表达均受到抑制，同时VSMC胞浆及胞核内磷酸化p65表达下降(p＜0.05)，同时NFATc1 mRNA及蛋白表达下降，与刺激组比(p＜0.05)。 (5)当预先予NF-κB抑制剂PDTC(30μmol/L)处理VSMC30min后，再予激动型CD137mAb刺激，发现VSMC细胞浆及细胞核内磷酸化p65活化受到抑制，并且NFATc1 mRNA及蛋白表达下降，与刺激组比(p＜0.05)。 结论： (1)TNF-α能刺激VSMC表达CD137，其CD137 mRNA水平及蛋白水平均升高; (2)CD137信号能促进VSMC增殖; (3)CD137信号可能通过TRAF6/NF-κB影响小鼠VSMC NFATc1的表达。