【摘 要】
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本文基于茶叶中微生物的检测现状提出了指数富集的配体系统进化技术（systematic evolution of ligands by exponential enrichment technology,SELEX）筛选出特异性适配体和表面增强拉曼光谱（Surface-enhanced Raman spectroscopy,SERS）技术联用对大肠杆菌进行快速检测的方法。1、以大肠杆菌为目标靶分子,
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本文基于茶叶中微生物的检测现状提出了指数富集的配体系统进化技术（systematic evolution of ligands by exponential enrichment technology,SELEX）筛选出特异性适配体和表面增强拉曼光谱（Surface-enhanced Raman spectroscopy,SERS）技术联用对大肠杆菌进行快速检测的方法。1、以大肠杆菌为目标靶分子,应用改进的SELEX技术,进行9轮孵育、筛选、富集,将孵育分离得到的每轮适配体库进行荧光修饰,用荧光显微镜考察适配体库轮次间亲和力的变化。将每轮得到的适配体库克隆测序,选择其中亲和力最好的8、9轮适配体库中的序列进行分析,选择具有保守序列且二级结构差异较大的单序列作为候选适配体进行亲和力验证,最终得到6条亲和力高的肠出血性大肠埃希氏杆菌适配体序列。将其中特异性最强的适配体荧光修饰后与不同类型的细菌孵育,对比孵育后荧光强度的差异,验证了该适配体的高特异性。本文筛选得到了肠出血性大肠埃希氏杆菌高亲和力、高特异性的适配体,为特异性识别、捕获和分离富集茶叶中的大肠杆菌提供了良好的研究基础。2、近年来由磁性内核外包覆金/银的复合衬底是SERS技术研究的重点。本文针对此高性能复合磁性SERS衬底的制备困难的问题提出来PEI改性制备磁性SERS衬底的方案,制备出了高性能的金壳包覆Fe3O4的磁性纳米颗粒—金壳磁珠。采用PEI静电作用修饰Fe3O4颗粒形成夹层,该夹层吸附3-5 nm胶体金纳米颗粒形成金种子作为后续金壳生长的位点,最终在保证磁球性能的情况下在外层包覆了连续的金壳。金壳磁珠粒径分布均匀、在溶液中分散性好、磁响应强且具有很好的SERS性能。3、研究了基于适配体和金壳磁珠联用的技术实现复杂溶液中大肠杆菌的快速SERS检测的方法。该方法以金壳磁珠为内核,通过化学吸附的方法实现了适配体在金壳磁珠上的修饰,成功制备了Fe3O4-Au-Aptamer磁性微球,该复合磁珠作为高效的大肠杆菌识别载体和SERS增强基底,实现了对样品中大肠杆菌的快速捕获、分离、富集和SERS检测,在大肠杆菌浓度10-1000 cfu/ml范围内检测效果最好,最低检测限可达10 cfu/ml,符合茶叶中大肠杆菌的限量标准。
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