【摘 要】
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目的基于针灸对化疗所致睾丸组织损伤的修复作用,本研究以化疗药物环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）致小鼠睾丸生精功能损伤为切入点,通过观察针刺、艾灸干预前后小鼠睾丸组织形态的变化,以及分析睾丸组织内相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax和支持细胞中雄激素结合蛋白（ABP）含量的变化,初步阐释针灸改善、修复CTX所致睾丸生精功能损伤的分子生物学机制。方法选用无特定病原体（SPF）级雄性昆明种
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目的延伸部分,国家自然科学基金面上项目:基于造血微环境及骨髓超微结构的针灸改善CTX化疗小鼠骨髓抑制的机制研究（81674080）；
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目的基于针灸对化疗所致睾丸组织损伤的修复作用,本研究以化疗药物环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）致小鼠睾丸生精功能损伤为切入点,通过观察针刺、艾灸干预前后小鼠睾丸组织形态的变化,以及分析睾丸组织内相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax和支持细胞中雄激素结合蛋白（ABP）含量的变化,初步阐释针灸改善、修复CTX所致睾丸生精功能损伤的分子生物学机制。方法选用无特定病原体（SPF）级雄性昆明种（KM）小鼠48只,7周龄,适应性喂养3d后,按体重分层随机分为空白组（A）、模型组（B）、针刺组（C）和艾灸组（D）,每组12只。采用CTX构建小鼠睾丸生精功能损伤模型,A组小鼠腹腔注射0.9%Nacl溶液0.02m L/g/只,B、C、D组小鼠腹腔注射CTX溶液0.02m L/g/只（浓度为5mg/m L）,每日定时注射1次,连续3d,于末次注射CTX溶液24h后完成模型制备,并从各组随机选取1只小鼠,颈椎脱臼处死后取出睾丸组织,做病理切片观察,以验证CTX致睾丸生精功能损伤模型成功。模型制备完成后,每日定时定员依次对各组小鼠进行干预,A、B组小鼠只进行抓取固定,不予干预;C、D组小鼠选取“大椎”及双侧的“膈俞”、“肾俞”、“足三里（后三里）”分别进行针刺和艾灸干预,每日1次,连续7d。末次干预24h后取材,每组随机选取2只小鼠,摘取睾丸组织以4%多聚甲醛固定,待做病理切片,观察睾丸组织的形态变化;各组其余小鼠睾丸组织摘取后,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测睾丸组织中Bcl-2、Bax及ABP的含量,采用SPSS 23.0 for Windows对数据进行分析。结果1针灸对CTX模型小鼠睾丸组织形态的影响:镜下观察空白组小鼠睾丸组织,发现其曲细精管形态完整、排列整齐,生精上皮可见各级生精细胞排列紧密有序,层次分明,结构清晰;与空白组比,模型组小鼠的曲细精管排列不规则,基膜不完整,厚薄不均一,各级生精细胞排列紊乱、间隙增大,管腔内成熟精子减少明显,出现细胞核浓染、核固缩为均质团块等病理变化,形成了多个变性空泡细胞,异型细胞数量增多;与模型组比,针刺组和艾灸组小鼠的睾丸曲细精管排列相对整齐、紧密,基膜相对完整,厚薄更加均匀,各级生精细胞排列更为有序,管腔内精子数量增多,空泡变性、核固缩为均质团块等病理现象明显减少。2针灸对CTX模型小鼠睾丸组织中Bcl-2、Bax及ABP含量的影响:与空白组比,注入CTX的各组小鼠睾丸组织中Bcl-2、ABP含量下降,Bax含量上升,具有显著性差异（P<0.05）;与模型组比,针刺组、艾灸组中Bcl-2、ABP含量上升,Bax含量下降,具有显著性差异（P<0.05）;与针刺组比,艾灸组中Bcl-2、ABP含量上升且Bax含量下降更为明显,但无统计学意义（P>0.05）。结论1 CTX可以造成小鼠睾丸组织损伤,形态学上主要表现为睾丸组织中曲细精管基膜不完整,各级生精细胞排列紊乱、间隙增大,腔内成熟精子减少、异型细胞数量增多等。针刺、艾灸可以明显改善曲细精管及各级生精细胞形态,修复生精上皮,增加管腔内精子数量,促进受损睾丸组织形态的恢复。2针刺、艾灸可提高CTX模型小鼠睾丸组织中Bcl-2、ABP含量,同时降低Bax含量,通过对睾丸组织中凋亡相关蛋白的良性调节,抑制睾丸组织细胞的异常凋亡,同时激发支持细胞功能,对生精细胞的产生起到促进作用,从而可改善和修复睾丸生精功能损伤。3针刺与艾灸均可以作为单因素干预手段,改善睾丸生精功能损伤,拮抗化疗毒副作用。在治疗效果上,二者无明显差异。
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