目的构建非酒精性脂肪肝小鼠模型,探讨心磷脂激活NLRP3炎症小体而促进非酒精性脂肪肝病变的机制。方法1.分别使用高脂饲料和低脂饲料喂养C57BL/6J小鼠各10只,16周后取肝脏组织,采用油红O染色、HE染色、免疫组化染色及血清肝功能测定,评估非酒精性脂肪肝模型建立状况。2.分别提取非酒精性脂肪肝模型组和对照组小鼠肝组织的总蛋白,采用Western Blot技术比较两组标本NLRP3的表达水平。3.分离培养C57BL/6J小鼠Kupffer细胞。分别用棕榈酸(模拟体内游离脂肪酸在Kupffer细胞沉积)和生理盐水(对照)刺激两组Kupffe细胞后,采用Western Blot比较两组的NLRP3表达水平;ELISA测定细胞培养液上清液的IL-1β水平;用带His标签的NLRP3过表达质粒转染Kupffer细胞,将细胞培养48h后提取蛋白,用protein-lipid overlay技术检测心磷脂与NLRP3蛋白结合情况。结果1.高脂饮食组较低脂饮食组小鼠的肝脏体积增大、肝细胞脂肪变性显著,Kupffer细胞明显增生,灶性炎症细胞浸润,外周血ALT显著增高(高脂组ALT为134.3U/L,低脂组为26U/L)。2.非酒精性脂肪肝模型组小鼠NLRP3炎症小体表达水平较对照组增高了42.16%。3.棕榈酸刺激的Kupffer细胞上清较对照组Kupffer细胞的上清含有更多的IL-1β,分别是169.3±6.8 pg/ml and134.6±2.4 pg/ml respectively(p<0.01)。棕榈酸刺激组NLRP3蛋白表达水平较对照组高103.68%;c-IL-1β蛋白水平也较对照组高38.78%。将Kupffer细胞总蛋白孵育PIP strip膜,再用抗His抗体杂交,含心磷脂的孔出现免疫印迹。结论1.非酒精性脂肪肝模型构建成功。2.NLRP3炎症小体在非酒精性脂肪肝组织中表达上调,提示其可能参与非酒精性脂肪肝的病变进程。3.棕榈酸刺激的Kupffer细胞NLRP3和c-IL-1β表达水平均明显增高。心磷脂能与Kupffer细胞中NLRP3炎症小体结合并将其激活,可能促进非酒精性脂肪肝的病理进程。