论文部分内容阅读
研究背景 光动力学治疗是近年来兴起的治疗肿瘤的新技术。它的作用机制除了光敏剂吸收光后产生的氧活性物质对肿瘤细胞或肿瘤血管内膜的直接杀伤外,还可引起机体对肿瘤的免疫反应。许多动物实验表明,PDT治疗后,机体产生了特异性抗肿瘤免疫反应。进一步的研究发现,用体外培养的肿瘤细胞经PDT处理后的裂解物制成的疫苗,接种于同基因型动物后,在体内可产生针对同种肿瘤的特异性免疫反应,在体外更有利于DC的分化、成熟。 蛋白质组学技术的日趋完善,为分离、鉴定一个特定蛋白质组中的蛋白质提供了有力的技术平台,也为寻找疫苗中特定的抗原成分提供了新的思路和方法。 目的 1、研究ALA-PDT在体外对人卵巢癌细胞的杀伤作用,寻找制备PDT人卵巢癌细胞裂解物的光敏剂及光照剂量。 2、研究PDT人卵巢癌细胞裂解物在体外引起的免疫应答。 3、分析PDT人卵巢癌细胞裂解物的蛋白质表达谱,寻找特异的蛋白。 方法 1、用MTT方法检测ALA-PDT对四种人卵巢癌细胞株的体外杀伤效果。 2、体外诱导培养DC,用PDT及冻融处理的人卵巢癌细胞裂解物负载DC,采用流式细胞仪检测DC免疫表型的改变,用ELISA方法检测IL-12分泌的改变;体外培养T细胞,用负载裂解物的DC诱导生成CTL,MTT方法检测CTL对肿瘤细胞的杀伤效应。 3、用超滤离心法进行PDT及冻融人卵巢癌细胞裂解物标本的预处理,二维电泳进行蛋白质分离,MALDI-TOF/MS和ESI-MS/MS对差异蛋白质点进行质谱鉴定。