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目的:探讨喉癌组织中TSLC1、survivin和stathmin基因启动子甲基化与喉癌发生、发展的关系,为喉癌早期诊断和预后分析提供一个新的检测指标。方法:(1) DNA提取采用蛋白酶k消化和苯酚-氯仿抽提法提取喉部正常粘膜、声带息肉、喉癌细胞Hep-2和喉癌组织DNA。(2)亚硫酸氢钠修饰取1μg上述DNA经亚硫酸氢钠处理,将非甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变。(3) RNA的提取及RT-PCR检测mRNA用TRIzol(按说明书操作)逐步提取上述培养细胞和组织总RNA。取总RNA 2μg逆转录合成cDNA。RT-PCR法检测在喉癌组织和正常组织中TSLC1,survivin和stathmin基因的表达情况。(4)甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR.MSP)针对DNA亚硫酸氢钠修饰后的改变设计两套引物分别扩增以区分甲基化和非甲基化。采用MSP法分别检测喉癌组织和正常组织中TSLC1 ,survivin和stathmin基因启动子甲基化情况。(5)统计学分析用SPSS 10.0软件进行统计学分析,基因启动子甲基化与喉癌患者临床病理的关联分析用卡方检验,P<0.05显示差异有统计学意义。结果: (1)有21/40 (52.5%)例喉癌组织TSLC1基因启动子区过甲基化,其在各病理分级、临床分期和分型之间差异无统计学意义(P>0.05),而在N分级(N0和N1)之间差异有统计学意义(P<0.05)。喉癌细胞Hep-2也显示TSLC1基因启动子区过甲基化。RT-PCR结果显示,所有甲基化的喉癌组织和喉癌细胞Hep-2中均无TSLC1mRNA表达,而喉部正常组织,声带息肉组织和非甲基化的喉癌组织中均有其表达。(2)在喉癌细胞株Hep-2和24/40(60%)的喉癌组织中有survivin mRNA的表达,在所有正常组织和息肉组织中未见其表达。survivin启动子在正常组织、息肉组织、Hep-2和喉癌组织中全部呈非甲基化状态。(3) 21/40(52.5%)的喉癌组织和1(1/5)例声带息肉组织有stathmin mRNA的表达,在喉癌细胞株Hep-2、正常喉部组织和其他组织中未见其表达。在正常组织、息肉组织、Hep-2和喉癌组织中stathmin启动子全部呈不完全甲基化状态。结论:(1)喉癌中TSLC1基因启动子区过甲基化与其mRNA失表达有关,可能是喉癌发生、发展的原因之一,可作为喉癌诊断和预后分析的检测指标。(2)未发现survivin和stathmin基因启动子区甲基化状态与其mRNA表达存在确切的联系。