2015年6月起,由禽腺病毒血清4型（Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）引起的以心包积聚淡黄色液体、肝炎和肾炎为主要临床特征的新型家禽传染性疾病——心包积水-肝炎综合征（Hydropericardium hepatitis syndrome,HHS）在我国山东、安徽、江苏、河南等省份大面积流行。该病易发生混合感染,主要危害3⁶周龄的肉鸡,死亡率最高可达90%,给家禽养殖业带来重大的经济损失。常规实验室检测方法需要特殊的仪器设备,仪器价格昂贵而且检测场地受到限制,检测耗时费力,在基层生产过程中存在诸多不便,所以建立一种快速、灵敏、便捷的检测方法十分必要。本研究建立了巢式PCR和环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）两种方法用于检测FAdV-4。通过对GenBank上已公布的27株禽腺病毒全基因序列进行比对,针对其高度保守区域设计特异性的分别针对I群禽腺病毒和FAdV-4的2对巢式PCR引物,建立了一种FAdV-4巢式PCR检测方法,并对该方法的反应条件以及反应体系进行优化。巢式PCR优化后反应条件为:第一轮反应最佳退火温度为60.4℃,退火时间35 s,循环30次,外引物浓度为0.9μmol/L,Mg²⁺浓度为2.5 mmol/L,rTaq DNA聚合酶浓度为1 U;第二轮反应最佳退火温度为54.6℃,退火时间30 s,循环30次,内引物浓度为0.5μmol/L,Mg²⁺浓度为1.0 mmol/L,rTaq DNA聚合酶浓度为1 U。该检测方法优化后呈现最高效率的特异性扩增,未见与其他鸡源易感病毒发生交叉反应,同时该检测方法具有较高的灵敏度,最低可检测到5.2 pg/μL的病毒DNA。同时,针对FAdV-4 Hexon基因序列设计了特异性LAMP引物,建立了一种对FAdV-4的LAMP检测方法,并对其反应条件和反应体系进行优化。优化后反应温度为62℃,反应时间为30 min,当外引物与内引物浓度之比为1:2时,扩增效果显著提升。当Mg²⁺浓度为6.0μmol/L时显示当前最好扩增效果。灵敏性试验结果显示该方法比巢式PCR检测方法灵敏度高出10倍,同时具有良好的特异性。最后运用两种检测方法同时对102份临床样本进行检测,LAMP检测方法检出的阳性率为34.3%,巢式PCR方法检出的阳性率为20.5%,说明LAMP检测方法更特异灵敏而有较好的应用前景。