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目的探讨脊髓原钙粘蛋白20（PCDH20）在大鼠胫骨癌痛发生机制中的作用。方法1.在T4DNA连接酶作用下，将线性化的病毒载体GV118与PCDH20DNA片段制备合成GV118-siRNA目的质粒，转化感受态细胞，对于长出的克隆应用菌落PCR鉴定，再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和对比分析。重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM2000共转染293T细胞，培养48h后，收集细胞培养上清液，将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度；并检测病毒载体在工具细胞神经元细胞中的转染效率，实时荧光定量PCR法检测PCDH20siRNA慢病毒基因沉默效率。2. SPF级雌性SD大鼠36只，体重180~200g，采用随机数字表法，将大鼠分为4组（n=9）：Sham组（S组）、胫骨癌痛组（BCP组）、BCP+Control-LV（LC组）、BCP+PCDH20-LV组（P组）。Sham组于大鼠右侧胫骨平台骨髓腔内注射灭活的Walker256细胞；胫骨癌痛模型于大鼠右侧胫骨平台骨髓腔内注射Walker256细胞；LC组和P组分别于脊髓内注射对照慢病毒和PCDH20siRNA慢病毒4μl，同日建立骨癌痛模型。并于模型建立前1thd（T1）、模型建立后3th、7th、14th和21thd（T2、T3、T4、T5）时测定机械缩爪阈值（MWT）。骨癌痛模型建立后21thd，取术侧胫骨，HE染色后光镜下观察胫骨破坏情况；取脊髓腰膨大组织，采用realtime PCR法、免疫组化法和Western blot法测定脊髓PCDH20和突触后致密物蛋白质95（PSD95）表达水平。结果1.成功构建了siRNA-PCDH20-lentivirus慢病毒，病毒滴度为2×109TU/ml；用该病毒体外转染神经元细胞，当感染复数（MOI）为10时，感染效率大于72%；RT-PCR法检测PCDH20基因沉默的效率为76.7%（P＜0.05）。2.与Sham组比较，BCP组、BCP+Control-LV组及BCP+PCDH20-LV组肿瘤细胞突破骨髓腔，侵犯骨皮质，骨皮质结构严重破坏。与Sham组比较，BCP及BCP+Control-LV组T3、T4和T5时MWT明显降低，脊髓PCDH20和PSD95mRNA及其蛋白表达水平明显上调（P＜0.05）；与BCP+Control-LV组比较，BCP+PCDH20-LV组T4和T5时MWT明显升高，脊髓PCDH20和PSD95mRNA及其蛋白表达水平下调（P＜0.05）。结论1.成功构建了siRNA-PCDH20-lentivirus慢病毒，该病毒载体转染神经元细胞的效率较高，且具有显著的基因沉默效果。2.胫骨癌痛模型大鼠脊髓背角，PCDH20和PSD95表达升高；通过siRNA-PCDH20-lentivirus慢病毒下调脊髓背角PCDH20表达，能够缓解骨癌痛的形成；结果推测PCDH20通过细胞粘附作用，促进兴奋性突触的形成，调节CNS信息传递功能，参与骨癌痛。