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目的：通过全骨髓培养法培养、分离、纯化骨髓基质干细胞,构建携带BMP2和VEGF165基因的重组pYr-adshuttle-4质粒,并通过脂质体介导将其转染至骨髓基质干细胞。将转染后的BMSCs进行体外培养,观察生物学特性、向成骨细胞分化的能力,探讨BMP2和VEGF165双基因修饰大鼠骨髓基质干细胞与单基因修饰诱导成骨能力的差异。方法：1.取小鼠双侧股骨骨髓并采用全骨髓培养法培养进行原代培养,通过换液和传代培养分离和纯化骨髓基质干细胞,传至第3代用于后续实验。2.分别构建携带BMP2和VEGF165基因的重组pYr-adshuttle-4质粒。3.按照未转染组、空载体组、BMP2单基因转染组、VEGF165单基因转染组、BMP2和VEGF165双基因共同转染组通过脂质体介导分别转染骨髓基质干细胞。4.转染后行常规细胞形态学观察7天；48h通过RT-PCR检测BMP2和VEGF165的mRNA含量,Western-Blot检测BMP2和VEGF165蛋白表达变化；转染后一周分别检测各组细胞成骨能力—碱性磷酸酶。结果：1.全骨髓细胞培养法成功分离、培养、纯化骨髓基质干细胞,骨髓基质干细胞呈长梭形样贴壁生长。2.成功构建携带骨形态发生蛋白-2、血管内皮生长因子-165的重组pYr-adshuttle-4质粒3.脂质体介导成功将携带BMP2和VEGF165基因的重组pYr-adshuttle-4质粒转染进骨髓基质干细胞,转染率高,无细胞毒性作用,转染后细胞生长活力增强。4.转染后BMSCs:RT-PCR检测显示BMP2+VEGF165双基因共同转染组mRNA水平表达高于骨形态发生蛋白-2组和血管内皮生长因子-165组单基因转染。5.Western-Blot检测显示共同转染组中BMP2和VEGF165基因组在蛋白水平表达量明显大于单基因组。6.双转染组中骨髓基质干细胞的ALP活性明显高于各单转染组(P<0.05)结论：1.全骨髓培养法成功的培养、分离并纯化得到骨髓基质干细胞2.利用脂质体介导BMP2和VEGF165基因pYr-adshuttle-4质粒共同转染BMSCs可在体外长期高效稳定共同表达BMP2和VEGF165基因,并诱导向成骨细胞分化。3.BMP-2、VEGF-165双基因修饰骨髓基质干细胞诱导成骨能力明显高于单基因修饰骨髓基质干细胞成骨能力。