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目的研究淋巴细胞上转录因子GATA-3、p-STAT6及p-STAT3在混合皮肤移植过程中的表达情况及其与自体角朊细胞和B7-H1的关系,探讨混合皮肤移植的相关免疫抑制机理。方法1.从KM乳鼠身上提取所需的角朊细胞、淋巴细胞及表皮细胞,运用免疫组化法检测所提取原代细胞的细胞质量。2.对所提取的三种细胞进行共培养,构建混合皮肤移植模拟体系(MELC体系)。3.24、48小时后,分离混合培养体系中的贴壁细胞及淋巴细胞,收集贴壁细胞的总蛋白,通过Western-blot检测各MELC体系中B7-H1的表达。同时,提取淋巴细胞的总RNA,运用实时荧光定量PCR检测淋巴细胞上GATA-3、STAT6及STAT3三种转录因子及细胞因子IL-10的m RNA表达水平。4.采用B7-H1单克隆抗体阻断的方法确认,MELC体系中淋巴细胞上GATA-3、STAT6及STAT3三种转录因子及细胞因子IL-10的表达升高是否为B7-H1所诱导。结果1.提取的三种原代细胞活性较高,体外培养稳定。免疫组化法检测原代细胞角蛋白抗体呈阳性,确为角朊细胞,符合实验要求。2.Western-blot检测结果显示,经过24、48小时混合培养后,加入自体角朊细胞的实验组混合培养体系中,随着共培养时间的延长,B7-H1蛋白的表达升高。而不含自体角朊细胞的各对照组混合培养体系中,B7-H1则低表达。3.实时荧光定量PCR检测结果显示,在MELC体系中混合培养24、48小时后,随着作用时间的增加,与不含自体角朊细胞的对照组MELC体系相比,含有自体角朊细胞的实验组中,淋巴细胞上GATA-3、STAT6、STAT3三种转录因子及细胞因子IL-10的m RNA表达水平皆显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。4..实时荧光定量PCR检测结果显示,在MELC体系中混合培养24、48小时后,随着作用时间的增加,与未加入抗B7-H1单克隆抗体阻断的实验组MELC体系及加入了同源对照抗体的对照组MELC体系相比,在加入抗B7-H1单克隆抗体的阻断组MELC体系中,淋巴细胞上GATA-3、STAT6、STAT3三种转录因子及细胞因子IL-10m RNA的相对表达量均呈降低趋势,差别有统计学意义(P<0.05)。结论在混合皮肤移植的过程中,自体角朊细胞可通过B7-H1分子促进淋巴细胞上GATA-3、p-STAT6及p-STAT3三种转录因子表达,继而负向调节免疫应答,最终诱导局部免疫抑制。