论文部分内容阅读
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起人和动物多种疾病的重要致病菌。一直以来人们主要采用抗生素控制和治疗S.aureus感染，但由于抗生素的广泛使用，导致耐药菌株不断出现，致使抗生素治疗几乎毫无效果。因此，研究和使用疫苗来防制S.aureus感染已成为热点。过去的研究表明，金黄色葡萄球菌表面的TraP、IsdA、IsdB、GapC蛋白具有良好的免疫原性，为了比较金黄色葡萄球菌TRAP、IsdA、IsdB、GapC的免疫原性和免疫保护作用，应用PCR的方法，分别扩增出金黄色葡萄球菌Newman株的目的基因并进行序列分析，再将目的基因分别插入到pQE-30载体上，导入宿主菌Escherichia coliM15(pREP4)并诱导表达和纯化重组蛋白。用纯化的重组蛋白分别免疫小鼠，检测小鼠血清中抗体水平；在体外用相应的抗原刺激淋巴细胞，ELSPOT检测免疫脾淋巴细胞分泌IL-4和IFN-γ的细胞频数，ELISA检测脾细胞培养上清中IL-17的分泌水平。首次免疫后35d时用金黄色葡萄球菌Newman、Wod46、HLJ23-1株对小鼠攻毒，结果表明TraP、IsdA、IsdB、GapC重组蛋白在E．coli M15中均获得表达；在首次免疫后35d时血清抗体水平，免疫脾脏淋巴细胞分泌的细胞因子与对照组相比，均显著升高(P<0.05)；攻毒结果表明，TraP、GapC、IsdB蛋白分别对Newman、Wood46、HLJ23-1菌株攻毒提供了较好的免疫保护作用。以上结果表明同一抗原对不同菌株攻毒所产生的免疫保护存在差异。