目的:间充质干细胞(MSC)是一类中胚层来源的多能干细胞,具有多向分化、造血支持及促进干细胞植入等功能。随着对其认识的不断深入,其免疫调节特性也越来越多地引发了研究者的关注[1,2];近来,MSC更是被作为免疫损伤性疾病的理想治疗策略而被广泛研究[26,27,28,29]。我们的前期研究发现,经体外预处理的人胎儿来源MSC可有效保护伴刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导的小鼠免疫性肝损伤病情进展,其作用机制可能与白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)表达增高有关。经检索文献,未见相关报道。本研究拟采用多种策略,调控IL-6在MSC中的表达,为进一步确证其是否是MSC保护免疫性肝损伤中的关键分子奠定基础。　　 方法:采用胶原酶消化贴壁传代法,自人胎儿脐带Wharton层获取细胞,经三代以上稳定传代后,行形态学观察、流式细胞术分析细胞表面标记分子及定向诱导分化予以鉴定。通过慢病毒IL-6高/低表达载体转染、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)和干扰素γ(interferon,IFN-γ)单独或联合应用等策略,上调/下调IL-6在MSC中的表达,PT-PCR、real-time PCR鉴定基因表达。　　 结果:　　 1脐带来源MSC的分离鉴定　　 1.1原代细胞可在5至14天形成细胞集落,细胞最初表现为两种形态,多部分为成纤维细胞样,一小部分为内皮细胞样,后者在传代中将逐步消失,至第4代以后,呈现典型的梭形生长形态。　　 1.2流式细胞检测结果显示,间质细胞标志CD29、CD90及CD105阳性表达;HLA-DR及造血细胞标志CD34阴性表达。　　 1.3脂肪样细胞定向诱导分化后,分离获取的细胞胞质中可出现大小不一的脂滴,油红染色后呈现红色;成骨样细胞定向诱导分化后,细胞可逐渐变方,Von Kossa染色结果显示,胞浆内有棕黑色区域。提示该细胞具有脂肪样和成骨样细胞分化潜能。　　 上述结果提示,我们从脐带获取的细胞具有MSC典型特征,可用于下一步研究。　　 2慢病毒IL-6表达载体的构建　　 2.1以质粒pLXSN/IL-6为模板,PCR扩增IL-6片段,与T载体相连接,转化扩增后,测序鉴定,结果显示序列正确。提示IL-6基因与T载体连接成功。　　 2.2 IL-6基因与慢病毒pBPLV载体相连接,转化扩增后,测序鉴定,结果显示序列正确。提示慢病毒IL-6表达载体(pBPLV/IL-6)构建成功。　　 3慢病毒IL-6表达载体转染MSC　　 RT-PCR结果显示,慢病毒IL-6表达载体(pBPLV/IL-6-MSC)的IL-6表达水平较慢病毒空载体转染的MSC及未转染MSC(pBPLV-MSC;MSC)显著增高(p＜0.05);　　 real-time PCR结果亦显示,pBPLV/IL-6-MSC组IL-6表达水平显著高于pBPLV/MSC组和MSC组(p＜0.05);　　 上述结果提示,pBPLV/IL-6转染可显著上调IL-6基因表达。　　 4慢病毒IL-6干涉载体转染MSC　　 RT-PCR结果显示,慢病毒IL-6干涉载体(pSicoR/IL-6-MSC)的IL-6表达水平较慢病毒空载体转染的MSC及未转染MSC(pSicoR-MSC;MSC)显著降低(p＜0.05);　　 real-time PCR结果亦显示,pSicoR/IL-6-MSC组IL-6表达水平显著低于pSicoR-MSC组和MSC组(p＜0.05);　　 上述结果提示,pSicoR/IL-6转染可显著下调IL-6表达。　　 5 ConA刺激的小鼠脾细胞培养上清对MSC IL-6表达的影响　　 RT-PCR、real-time PCR结果均显示不同浓度小鼠脾细胞培养上清处理后UCMSC IL-6表达水平均高于对照组(p＜0.05);　　 RT-PCR、real-time PCR结果均显示同一浓度小鼠脾细胞培养上清处理后UCMSC于不同时间点IL-6表达水平均高于对照组(p＜0.05);　　 上述结果提示,ConA刺激的小鼠脾细胞培养上清可显著上调IL-6表达。　　 6细胞因子TNF-α和IFN-γ联合以及单独应用对MSC IL-6表达的影响RT-PCR结果显示不同浓度TNF-α和IFN-γ联合应用其IL-6表达量显著高于对照组(p＜0.05);　　 RT-PCR、real-time PCR结果显示同一浓度TNF-α和IFN-γ联合以及TNF-α单独应用后UCMSC各时间点IL-6表达水平均高于对照组(p＜0.05),而IFN-γ单独应用后各时间点IL-6表达水平均低于对照组(p＜0.05)。　　 上述结果提示,TNF-α和IFN-γ联合应用以及TNF-α单独应用可上调IL-6表达,而IFN-γ单独应用则下调IL-6表达。　　 结论:　　 1采用胶原酶消化贴壁传代法,可自人胎儿脐带Wharton层成功获取合格的MSCC；　　 2成功构建了慢病毒IL-6表达载体pBPLV/IL-6；　　 3慢病毒IL-6表达载体pBPLV/IL-6、ConA刺激的小鼠脾细胞培养上清、TNF-α单独或联合IFN-γ应用可显著上调MSC IL-6基因表达；　　 4慢病毒IL-6干涉载体pSicoR/IL-6和IFN-γ单独应用可显著下调IL-6基因表达。