近年来,TLRs激动剂作为肿瘤疫苗佐剂被广泛投入应用,可单独使用,为增强疫苗的免疫反应,也可将其联合应用。将TLRs配体联合应用于免疫细胞作用不尽相同,可能表现为协同促进,亦可能相互间拮抗。因此,研究巨噬细胞被TLRs配体作用后对其极化的影响及机制有望为TLRs信号在免疫细胞间的联合应用机制研究提供理论基础。本组前期研究发现TLR4激动剂LPS以及TLR7/8激动剂R848联合可协同诱导小鼠巨噬细胞系（RAW264.7）向M1型极化。然而,LPS作为一种内毒素,本身具一定的副作用,不适用于后续的动物实验及疫苗佐剂的开发。因而,本研究选用TLR4激动剂——单磷酰脂质A（MPLA）替换LPS,将其与TLR7/8激动剂R848联合作用,探讨其对巨噬细胞极化影响并初步探讨其机制:首先,为验证MPLA及R848联合对巨噬细胞极化的影响,将MPLA和R848单独或联合作用于RAW264.7,采用Griess法、Western blot、q PCR检测巨噬细胞极化指标NO分泌,及i NOS、Arg-1的表达情况。结果显示:与对照或单独给药组相比,MPLA及R848联合作用后,NO分泌量及i NOS的表达水平最高,Arg-1的表达水平最低,提示两药联合作用于巨噬细胞可使其活化并向M1型极化的效果最显著。然后,我们使用小鼠腹腔巨噬细胞用IL-4刺激诱导M2型巨噬细胞,随后加入MPLA及R848,通过检测i NOS、Arg-1,探讨MPLA和R848联合能否将M2型巨噬细胞翻转为M1型,结果表明:MPLA及R848单独作用时,不具备翻转能力,二者联合作用时可将M2型腹腔巨噬细胞翻转为M1型。进一步,我们以STAT3的表达情况为切入点,探讨MPLA和R848联合诱导巨噬细胞极化的机制,采用Western blot、q PCR分析STAT3的上下游信号AKT、STAT1、SOCS3、SOCS1、IκB的表达,结果表明:MPLA及R848处理巨噬细胞后,单独组中STAT3、SOCS3与IκB的表达与对照组相比均升高,AKT、STAT1和SOCS1的表达均降低;当两药联合后,STAT3、SOCS3与IκB的表达升高最为显著,AKT、STAT1、SOCS1的表达降低最显著。随后,为验证在巨噬细胞极化过程中STAT3起到的作用,我们加入STAT3抑制剂后,再分析MPLA及R848对巨噬细胞极化及信号的影响。结果显示:加入STAT3抑制剂后,MPLA或R848单独给药组i NOS的表达与对照组相比略微升高,但与未加入抑制剂相比,显著降低,两药联合组中的协同效果被解除,而Arg-1的变化趋势不显著;在加入STAT3抑制剂后,单独组中SOCS3与IκB的表达与对照组相比略有降低,两激动剂联合组中的表达与对照组相比略有升高,但与只加入激动剂相比其协同效果被解除,STAT1和SOCS1的效果不显著。提示STAT3在MPLA联合R848诱导的巨噬细胞极化中起重要作用。本研究提示MPLA和R848联合可使巨噬细胞活化并向M1型极化,且可以翻转由IL-4诱导的M2型巨噬细胞为M1型,同时,揭示了STAT3在巨噬细胞极化过程中起着重要作用。研究有望为肿瘤治疗提供理论基础,同时为免疫佐剂的研发提供新策略。