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目的:1基于TCGA数据库中乳腺癌miRNA的表达信息,通过Cox比例风险回归模型构建基于miRNA的乳腺癌预后预测模型。2检测miR-1247-5p在乳腺癌中的表达,并对其临床意义和功能进行分析。3对miR-1247-5p潜在的机制进行探讨。方法:1运用Morpheus软件对TCGA数据库中乳腺癌及其癌旁组织的miRNA进行差异表达分析,筛选出差异表达明显的miRNA;随后对差异表达明显的miRNA通过Cox比例风险回归模型的构建,建立基于miRNA的最佳预后预测模型;运用Kaplan-Meier生存分析、Log-rank检验及ROC曲线分析对基于miRNA的预后模型进行检验;卡方检验或Fisher精确检验对预后模型与乳腺癌患者的临床病理特征进行相关性分析;单因素、多因素Cox回归分析检测基于miRNA的乳腺癌预后预测模型是否为乳腺癌患者的独立预后因子。2分析TCGA数据库中具有完整临床病理特征的乳腺癌患者的miR-1247-5p表达水平,采用RT-qPCR在24对乳腺癌及癌旁组织中进行验证;运用Kaplan-Meier生存分析、Log-rank检验及单因素、多因素Cox回归分析对miR-1247-5p与总生存率、无复发生存率之间的相关性进行分析;运用CCK8和流式细胞实验分别检测miR-1247-5p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。3通过在线数据库预测和文献查阅筛选出miR-1247-5p潜在的靶点,采用双荧光素酶报告系统、RT-qPCR和western blot(WB)实验对miR-1247-5p和靶点之间进行直接和间接验证;运用RT-qPCR和IHC分别检测miR-1247-5p和靶蛋白的表达水平,并利用Pearson相关性分析研究两者的相关性;采用WB实验检测miR-1247-5p对下游信号通路的影响。结果:1通过对TCGA数据库中103对乳腺癌及其癌旁组织的miRNA进行差异表达分析,我们筛选出100个差异表达最明显的miRNA,包括上调的50个和下调的50个,随后我们将具有完整临床病理特征的839例乳腺癌患者随机分为training set和testing set两组患者,先在training set中对这筛选出的100个miRNA进行Cox比例风险回归模型的构建,得到了基于miR-1247-5p,miR-29a-3p和miR-148b-3p的3-miRNA乳腺癌预后预测模型,在testing set和entire set患者中进行验证,结果均提示低风险组患者比高风险组患者预后好,且具有高度的诊断敏感性和特异性;多因素Cox回归分析结果提示基于3-miRNA的乳腺癌预后模型是乳腺癌患者的独立预后因子。2在乳腺癌和癌旁组织中检测miR-1247-5p的表达水平,结果提示miR-1247-5p在乳腺癌组织中表达水平显著低于癌旁组织,具有高度的诊断敏感性和特异性;临床病理特征相关性分析提示miR-1247-5p与乳腺癌患者的年龄和肿瘤大小相关;预后分析提示miR-1247-5p与乳腺癌患者总生存率和无复发生存率成正相关,多因素Cox回归分析结果提示miR-1247-5p是乳腺癌患者总生存率和无复发生存率的独立预后因子;CCK8实验结果提示miR-1247-5p抑制乳腺癌细胞的增殖;流式细胞学实验分析结果提示miR-1247-5p促进乳腺癌细胞的凋亡。3通过在线数据库分析和文献查阅,我们鉴定出miR-1247-5p的靶基因-DVL1;双荧光素酶报告实验结果提示miR-1247-5p能明显抑制野生型DVL1-3’UTR的活性;RT-qPCR和WB实验结果提示,miR-1247-5p对DVL1的转录后水平调节起着主要作用;Pearson相关性分析结果提示miR-1247-5p和DVL1的表达水平呈显著负相关;WB实验检测miR-1247-5p对下游信号通路的影响,结果提示miR-1247-5p能抑制DVL1、活化的β-catenin,及其下游效应分子c-Myc,CyclinD1和MMP7。结论:1基于miR-1247-5p,miR-29a-3p和miR-148b-3p的3-miRNA乳腺癌预后预测模型是乳腺癌患者的独立预后因子。2 miR-1247-5p在乳腺癌中起抑癌基因的作用,是乳腺癌患者总生存率和无复发生存率的独立预后因子;功能上分析提示miR-1247-5p能抑制乳腺癌细胞的增殖、促进细胞凋亡。3机制研究结果提示miR-1247-5p通过靶向抑制DVL1,进而抑制Wnt/β-catenin信号通路。