烟草是山东省重要的经济作物之一,病害的发生一直是影响其优质稳产的重要限制因素。其中,根茎类病害是烟草的一大类重要侵染性病害,尤其在多年连作影响下,根茎部病害严重影响了烟草生长和烟叶品质。山东省烟草根茎部病害主要有黑胫病、青枯病、立枯病、低头黑病、根黑腐病等。多年来各研究单位和生产部门主要致力于黑胫病、线虫病的防治和抗病育种工作,使这几类病害的持续治理取得了显著效果。但是受烟草连作影响,烟株根际微生物群落的演变更替,土传根病种类增加,根黑腐病等原属次要地位的病害危害逐年加重,部分地区已成为主要根茎部病害。由于烟草根黑腐病常与其它烟草根茎部病害混合发生,给病害的诊断造成困难,而生产上则因为不明发病原因,难以有针对性的防治措施。因此,本研究通过对根黑腐病病菌的分子检测和病害的防治药剂筛选,为根黑腐病的早期诊断和防治提供理论基础,对保障烟草的稳产优质和持续发展具有重要意义。本研究主要获得以下结果:1.建立了一套快速、高效的检测鉴定烟草根黑腐病菌的PCR方法。本研究以采自山东烟区的烟草根黑腐病菌为目的菌株,提取基因组DNA,并用真菌通用引物ITS1/ITS4扩增其rDNA-ITS区序列,连接到pMD18-T载体转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞,阳性克隆送交测序。将测得的序列(GeneBank登录号为EU794001)与GeneBank上已发表的Thielaviopsis basicola和其它烟草病原真菌ITS区序列进行比对,设计了一对特异引物TB-5/TB-3用于T. basicola的分子检测。利用该引物对包括T. basicola在内的13个烟草病原菌菌株的基因组DNA进行PCR扩增,结果表明:只有T. basicola能扩增到一条400 bp左右的特异性条带,其它菌株及阴性对照均无扩增产物。对烟草组织和土壤的检测结果也表明,该对引物能特异性的检测到T. basicola基因组DNA的存在。该引物对T. basicola基因组DNA检测的灵敏度为100 fg/μL。2.对烟草根黑腐病的防治药剂进行了筛选。本研究根据烟草根黑腐病病原菌的特点和各药剂的药效范围及理化性质选择了甲基托布津、福美双、多菌灵、甲霜灵·锰锌等七种抗真菌性药剂进行了室内药剂筛选测定。结果表明多菌灵在12 h和24 h对孢子萌发的抑制率分别为56.0%和58.6%,其余六种杀菌剂对孢子萌发的抑制率为100%。甲基托布津、多菌灵、大生M-45和杀毒矾等4种药剂对烟草根黑腐病菌的菌丝生长有较强的抑制作用,且效果稳定。23.对四种抑菌效果较好的杀菌剂对烟草根黑腐病菌的室内抑菌毒力进行了测定。在药剂筛选的基础上,采用生长速率法测定了多菌灵、甲基托布津、大生M-45和杀毒矾等4种杀菌剂对烟草根黑腐病菌的室内抑菌毒力,并对实验结果进行回归分析。结果表明,这4种药剂对烟草根黑腐病菌的EC50分别为0.4251、5.3134、30.2686和37.2234 mg/L,EC90分别为0.8170、11.4312、110.1398和160.5393 mg/L。并且,结合对这四种药剂有效成分和作用机理的比较,确定最佳的用药方式为多菌灵与大生M-45交替施用。