维生素A对感染伪狂犬病毒妊娠雌鼠免疫功能及繁殖性能的影响

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本试验旨在研究不同维生素A(Vitamin,VA)水平对感染伪狂犬病毒(PseudorabiesVirus,PRV)雌鼠妊娠第9天免疫功能及繁殖性能的影响。VA缺乏模型建立后,选择体重为36.65±7.35(g)的160只雌鼠按照不完全配对试验设计分到8个处理组:其中5个VA水平(0 IU/kg、4000 IU/kg、10000 IU/kg、25000 IU/kg、50000 IU/kg)为PRV攻毒组,3个VA水平(0 IU/kg、4000 IU/kg、10000 IU/kg)为注射PBS的对照组。雌鼠于妊娠0天腹腔注射PRV或PBS。妊娠第9天屠宰收集孕鼠血清、脑、肝脏、脾脏、子宫和胚胎。利用HPLC测定肝脏中视黄醇浓度:普通PCR法检测脑组织PRV感染情况;计算脾脏指数;利用透射免疫比浊法测定血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度;利用ELISA法测定血清细胞因子(IL-1β、IFN-γ、IL-4、IL-10)浓度;利用RT-PCR方法检测目的基因Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)、7、9 mRNA在子宫和胚胎中的表达量。结果表明:1、肝脏中视黄醇浓度随VA水平的增加而增加。攻毒后,50000 IU/kg组孕鼠肝脏中视黄醇浓度显著高于其它VA水平组(P<0.05)。攻毒组肝脏中视黄醇浓度低于PBS组,且4000 IU/kg攻毒组视黄醇浓度显著低于相同VA水平下PBS组(P<0.05)。2、攻毒后,VA缺乏组脾脏指数显著低于其它VA水平组(P<0.05)。注射PBS条件下,0 IU/Kg和4000 IU/Kg组脾脏指数显著低于10000 IU/Kg组(P<0.05)。4000IU/Kg攻毒组脾脏指数显著高于相同VA水平下PBS组(P<0.05)。3、攻毒后,50000 IU/Kg组血清IgA和IgM水平显著高于0 IU/Kg组(P<0.05)。除VA缺乏组外,IgG水平随VA水平的增加而增加,4000 IU/Kg组显著低于10000IU/Kg组、25000 IU/Kg组和50000 IU/Kg组(P<0.05)。注射PBS条件下,IgA、IgM和IgG水平随VA水平的增加而增加。攻毒组IgA和IgM水平低于PBS组,IgG水平高于PBS组。4、补充VA有降低血清IL-1β、IFN-γ水平而增加IL-4、IL-10水平的趋势。攻毒后,25000 IU/Kg组血清IL-1β水平显著低于其它VA水平组(P<0.05)。10000 IU/Kg组、25000 IU/Kg组和50000 IU/Kg组IFN-γ水平显著低于0 IU/Kg组和4000 IU/Kg组(P<0.05)。25000 IU/Kg组IL-4水平显著高于其它VA水平组(P<0.05)。25000 IU/Kg组IL-10水平显著高于0 IU/Kg组(P<0.05)、4000 IU/Kg组(P<0.05)和10000 IU/Kg组(P<0.05);25000 IU/Kg组和50000 IU/Kg组间IL-10水平无显著差异(P>0.05)。注射PBS条件下,10000 IU/Kg组IL-1β、IFN-γ水平显著低于0IU/Kg组(P<0.05)。血清IL-4和IL-10水平随VA水平的增加而增加,其中10000 IU/Kg组血清IL-4水平显著高于0IU/Kg组(P<0.05)。攻毒组血清1L-1β、IFN-γ水平高于PBS组,血清IL-4和IL-10水平低于PBS组。5、补充VA降低妊娠9天子宫和胚胎TLR3、TLR7、TLR9相对表达量。攻毒后,25000 IU/Kg和50000 IU/Kg组子宫及胚胎TLR3、TLR7、TLR9相对表达量显著低于0 IU/Kg(P<0.05)和4000 IU/Kg(P<0.05)组。注射PBS条件下,10000 IU/Kg组子宫和胚胎TLR3、TLR9及胚胎TLR7相对表达量显著低于0 IU/Kg组(P<0.05)。攻毒组子宫和胚胎TLR3、TLR7、TLR9相对表达量高于PBS组。6、攻毒后,VA缺乏增加孕鼠死亡率和流产率,补充VA有降低死亡率和流产率趋势(P>0.05)。7、攻毒后,25000 IU/Kg组妊娠9天活胚数和分娩活仔数显著高于0 IU/kg组(P<0.05)。活胚数随VA水平增加呈二次曲线变化,VA添加量为34265 IU/Kg时(正常需要量的8.5倍)达最大值。注射PBS条件下,妊娠9天活胚数和分娩活仔数随VA水平的增加而增加。攻毒组活胚数和分娩活仔数低于PBS组,且4000 IU/Kg攻毒组活胚数显著低于相同VA水平下PBS组(P<0.05)。结论:1、VA临界缺乏状态下,感染PRV导致死亡率和流产率增加,活胚数和分娩活仔数降低;补充VA可降低孕鼠死亡率、流产率,提高妊娠9天活胚数和分娩活仔数;妊娠第9天活胚胎数达最大值时,孕鼠对VA的需要量达正常需要量的8.5倍。2、VA缺乏的孕鼠感染PRV后上调TLR3、TLR7、TLR9 mRNA相对表达量,加剧Th1型促炎症细胞因子的表达,影响Th1/Th2免疫平衡状况,不利于动物繁殖性能的发挥;补充VA可降低TLR3、TLR7、TLR9 mRNA相对表达量,提高Th2型细胞因子的表达,改善Th1/Th2免疫平衡,从而对胚胎发育提供免疫保护效应。3、补充VA可提高感染PRV孕鼠血清免疫球蛋白水平,提高孕鼠体液免疫功能,并改善胚胎发育。
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