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背景:关节炎是一种发生在人关节及周围组织的炎症,引起关节炎的因素有很多,可能是炎症、感染、创伤等等。关节炎表现为关节红肿,热,痛。据统计我国50岁以上人群中关节炎的患病率在50%以上,关节炎对患者正常生活有着极大的影响,严重者生活不能自理,导致关节残疾等。西瑞香素(Daphnoretin),化学名7-羟基-6-甲氧基-3,7’-双香豆素酯,又名了哥王素,在众多豆科、芸香科和瑞香科的植物中有较丰富的含量,经提取纯化工艺后可得西瑞香素。在传统医学中使用含有西瑞香素的了哥王、祖师麻等药材治疗关节炎等炎症。另据文献报道,西瑞香素还具有抗肿瘤、镇痛、抗菌、抗焦虑、抗病毒等功效,故本课题将西瑞香素作为主要研究对象,以提高西瑞香素实用性。目的:通过THP-1细胞炎症模型的药效实验、ELISA实验检测各细胞因子受西瑞香素的影响,来验证西瑞香素的抗炎效果。建立Caco-2细胞的Tanswell模拟小肠转运模型,通过比较西瑞香素在能量抑制剂、转运蛋白抑制剂的存在下西瑞香素在Tanswell模拟小肠转运模型中的吸收情况,研究西瑞香素在人体肠道中的吸收机制,来为以后西瑞香素药代动力学和临床应用提供理论基础。方法:第一部分抗炎实验中,实验采用了CCK-8法检测不同浓度的西瑞香素对THP-1细胞活性的影响,并通过ELISA实验检测经LPS(脂多糖)诱导后THP-1细胞炎症模型分泌的各细胞因子的水平,和经西瑞香素处理后对细胞因子分泌量的影响,来验证西瑞香素对炎症细胞的作用。第二部分转运机制研究中,使用经典的MTT法检测西瑞香素对Caco-2细胞的毒性,来决定实验中西瑞香素的浓度区间。采用Caco-2(结肠腺癌细胞)建立Transwell转运细胞模型,使用细胞电阻仪检测单细胞膜的生长程度,并通过检测细胞分泌的AKP(碱性磷酸酶)的浓度来观察Caco-2单细胞膜分化的程度,通过酚红实验来验证细胞单层膜的完整性。利用建立的Caco-2细胞的Tanswell模拟小肠转运模型,结合能量抑制剂和转运蛋白抑制剂,通过HPLC(高效液相)法检测Transwell转运细胞模型的上下室中的西瑞香素的含量,来研究西瑞香素通过人体小肠上皮细胞吸收的转运机制。结果:CCK-8法检测不同浓度的西瑞香素对THP-1细胞活性的影响,实验结果表明在西瑞香素浓度高于10μg/ml时可以明显的抑制TNF-α炎症因子的分泌(P<0.05),在浓度高于1μg/ml时可以明显的抑制MCP-1,IL-1β炎症因子的分泌(P<0.05),50μg/ml、20μg/ml、10μg/ml三种浓度的西瑞香素对IL-6炎症因子的分泌有影响,分泌水平明显受到西瑞香素浓度的影响P值均小于0.05,但作用时间为12h西瑞香素浓度是10μg/ml的一组对比LPS组并没有显著性。采用MTT法测定西瑞香素对Caco-2的细胞毒性,结果表明西瑞香素溶液浓度在20μg/ml以下时对Caco-2细胞毒性可以忽略不计。在建立Caco-2细胞转运模型并验证模型可靠性后,实验通过加入不同转运蛋白抑制剂来研究西瑞香素的转运机制,实验结果表明加入能量抑制剂后西瑞香素在模型中的转运AP-BL和BL-AP均受到显著影响(P<0.05)表明西瑞香素的转运是一种能量依赖性的过程。加入P-gp蛋白抑制剂后西瑞香素转运没有受到显著性的影响(P>0.05),表明P-gp蛋白并未参与西瑞香素的转运过程。加入MRP2蛋白抑制剂后,西瑞香素AP-BL的Papp提高了7.1%,BL-AP方向并没有受到显著性影响,此处提示西瑞香素的转运过程中可能有MRP2蛋白的参与。加入BCRP蛋白抑制剂后AP-BL方向转运与西瑞香素组并没有显著性差异(P>0.05),但BL-AP方向转运的表观渗透系数较西瑞香素组降低了23.8%,且PAB/PBA为0.75说明西瑞香素转运过程中有BCRP蛋白的参加。结论:实验发现西瑞香素对细胞分泌炎症因子具有较强的抑制作用,但对THP-1细胞活力和细胞形态没有较大影响,本实验建立Caco-2细胞Transwell模型可用于研究西瑞香素在人体细胞中的吸收分布代谢,为西瑞香素的下一步研究打下了坚实基础。