利用FOX hunting system技术筛选碱茅中与胁迫相关基因

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:tonghuasong00000
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碱茅(Puccinellia tenuifolra)是一种广泛分布于我国东北部平原盐碱地的多年生草本植物,属于禾本科碱茅属,其适应性极强,能在极其恶劣的盐碱化土壤生长,甚至在碱斑周围也能正常生长。对于碱茅这种特殊的野生耐盐植物具有潜在的抗逆性相关基因资源,本研究是应用了新型的功能基因选择性筛选技术FOX hunting system首次通过模式生物酵母对其进行研究。通过构建碱茅全长cDNA基因文库,连接到大肠杆菌-酵母穿梭型表达载体pAUR101上,转化到酵母菌株InVscI中,并对转化得到的碱茅全长cDNA酵母文库进行了非生物胁迫的筛选和分析。根据研究目的选择了对碱茅全长cDNA酵母文库进行耐NaCl盐胁迫筛选,初步分析获得的56个碱茅cDNA酵母菌株,确定主要研究其中的耐NaCl盐胁迫性较强的碱茅cDNA酵母菌株15个。通过进一步对这15个碱茅cDNA酵母菌株耐NaCl盐胁迫、NaHCO3盐胁迫和耐Mannitol干旱胁迫分析,发现在不同胁迫逆境和不同胁迫浓度梯度下,获得的15个碱茅cDNA酵母菌株都表现出一定的耐受性,生长状况相互有差异,但均好于空载酵母菌株对照的生长状态。   克隆15个碱茅cDNA酵母菌株所携带的碱茅全长cDNA,获得了其中10个。对这10个碱茅cDNA进行测序,并与模式植物的已知基因的同源性做比对,发现其中9个菌株所携带的基因均是新发现的基因,且基因功能未知。   菌株Y011中携带的基因全长1162bp,包含的开放阅读框架(ORF)长为756bp,编码252个氨基酸残基,属于了Y型液泡膜水通道蛋白。与小麦、大麦、毛竹和玉米等植物的TIP基因具有很高的同源性。
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