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目的:Toll样受体(TLRs)不仅是参与天然免疫反应的重要受体,也是连接天然免疫和特异性免疫的桥梁。最新研究提示,TLRs及其信号转导途径可能参与抗磷脂综合征(APS)的病理机制。本论文重点探讨TLR4在抗磷脂抗体/抗原复合物(anti-β2GPI/β2GPI复合物)诱导单核细胞株THP-1细胞表达组织因子(tissue factor,TF)中的作用;以及TLR4的作用是否依赖细胞表面另一分子—膜联蛋白Ⅱ(Annexin A2,ANX2)。方法:①利用荧光定量PCR(Real-time PCR)检测anti-β2GPI/β2GPI诱导THP-1细胞TF mRNA的表达,采用试剂盒检测细胞TF活性。②利用自制的β2GPI胶联亲和层析柱(β2GPI-Affi-Gel)分析β2GPI与THP-1细胞表面相应受体结合情况。③Real-time PCR及Western蛋白印迹检测anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导细胞表达TLR4、MyD88(髓样分化因子88)、MD-2(髓样分化蛋白-2)情况。④观察TLR4途径抑制物—紫杉醇是否干预anti-β2GPI/β2GPI复合物对细胞的作用。⑤利用本课题组已有的ANX2 RNA干扰慢病毒(LV-RNAi-ANX2)感染THP-1细胞,验证内源干扰效率,建立ANX2 RNAi细胞模型。⑥检测anti-β2GPI/β2GPI复合物对慢病毒LV-RNAi-ANX2感染后THP-1细胞的TLR4、MyD88、MD-2以及TF的表达变化。结果:①Anti-β2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)显著增加THP-1细胞TF mRNA水平及TF活性(与对照比较p＜0.05)。②THP-1细胞表面的TLR4及ANX2能够结合于β2GPI-Affi-Gel柱,从而被洗脱下来。③Anti-β2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)刺激THP-1细胞表达TLR4、MyD88、MD-2明显升高(与对照比较p＜0.05)。④紫杉醇(1μmol/L)能够抑制anti-β2GPI/β2GPI复合物对细胞的刺激效应。⑤慢病毒按最佳MOI值100感染THP-1细胞,病毒感染THP-1细胞后ANX2的mRNA和蛋白水平的表达均被沉默。⑥采用同样的anti-β2GPI/β2GPI复合物刺激ANX2沉默后的THP-1细胞,其TLR4、MyD88、MD-2表达水平明显减弱;且TF的表达也显著降低(与未干扰细胞比较p＜0.05)。结论:TLR4及相关信号分子在anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中具有重要作用,并且部分依赖ANX2。紫杉醇可以干预这一过程,为APS血栓形成的预防及治疗提出了新思路。