橡胶草橡胶生物合成中SRPP基因的初步探究

来源 :北京化工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tdsc110
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橡胶草具有适应性强、种植密集、生长期短、采收自动化和产胶优质等优点,是一种具有极高开发价值的经济作物。本论文提取并测定了橡胶草根部最主要的三种生物产品的含量(w/w%)。橡胶的含量为5.78%~8.1%,菊粉的含量为18.2%~21.5%,蛋白质的含量为7.45%~9.54%。这为橡胶草的选种提供了参考。另外,橡胶草是研究植物橡胶合成机理的理想模型植物,具有很高的科学意义和应用价值。本论文利用qRT-PCR技术先是筛选出了一个可应用于橡胶草体系的内参基因,即β-actin,然后在不同样品中分析了SRPP基因家族与橡胶含量的关系。结果表明,SRPP6可能与橡胶草橡胶的合成与调控作用无关;SRPP1和SRPP2可能直接参与橡胶的合成与调控。SRPP3可能在参与橡胶合成的同时还存在其他生理作用。CRISPR/Cas9系统成本低廉且简便易行,被广泛应用于对植物的基因编辑,本论文首先构建并检测了作用于橡胶草的CRISPR/Cas9双元载体。用转化有双元载体的农杆菌浸染橡胶草根的细根,突变体的存活率为26.7%~33.3%。Sanger测序结果可知srRNA-1植株没有突变,srRNA-2突变体植株为嵌合体、杂合体或双等位基因突变体。与对照组相比,sgRNA-1和sgRNA-2突变体中的SRPP1基因表达程度的降低和两个突变体中Cas9蛋白基因表达程度的上升,预示着CRISPR/Cas9系统对橡胶草有一定的作用。突变体中的SRPP2、SRPP3和SRPP6三个基因的表达程度的上升,说明SRPP基因家族中的不同基因存在竞争关系。这为橡胶草的基因功能研究以及对作物的遗传育种提供了更精准的手段。CRISPR/Cas9技术应用于橡胶草的研究才刚刚起步,这需要我们继往开来,不断完善与之相配的数据库,更加方便科学地设计靶点以及进行脱靶分析。
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