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目的:侵袭和转移是评价卵巢癌预后水平的重要指标。G蛋白耦联受体(Gprotein-coupled receptor30,GPR30)与雌激素具有高亲和力,是一种新型的雌激素受体。本研究检测GPR30在人类上皮性卵巢癌中的表达,及其与基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达的相关性;在体内研究的基础之上,采用上皮性卵巢癌细胞系OVCAR5,进一步探讨GPR30在卵巢癌细胞侵袭和转移过程中的作用及其可能的分子机制,以期为临床卵巢癌的治疗提供新的药物作用靶点。
材料方法:本研究收集39例上皮性卵巢癌组织标本,以4例正常卵巢组织作对照,采用免疫组化法检测GPR30和MMP-9在上皮性卵巢癌的表达,使用x2检验,Fishers精确检验以及Spearman等级相关检验进行统计学分析。在上述结果的基础上,进一步探讨GPR30在卵巢癌侵袭转移中的作用,选用OVCAR5卵巢癌细胞系,采用Transwell、Wound healing检测雌二醇(estradiol,E2)、GPR30激动剂G-1和G蛋白耦联受体抑制剂PTX对细胞侵袭和迁移能力的影响;并应用RT-PCR、Western Blot和明胶酶谱进一步探讨E2、G-1和PTX对MMP-9表达及酶活性的影响。另外,还采用了RNAi技术抑制GPR30的表达,进一步验证GPR30是否参与卵巢癌细胞的侵袭和转移过程。
结果:
(1)上皮性卵巢癌中GPR30的高表达率显著高于良性卵巢肿瘤(P<0.01)和正常卵巢组织(P<0.05);MMP-9的高表达率显著高于正常卵巢组织(P<0.05),但与良性卵巢肿瘤无明显差异。不同病理类型上皮性卵巢癌的GPR30高表达率之间存在显著性差异(P<0.05);临床Ⅲ~Ⅳ期上皮性卵巢癌标本GPR30高表达率显著高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05);三个年龄组病例中的GPR30高表达率之间未见明显差异。Spearman等级相关分析显示上皮性卵巢癌组织中GPR30与MMP-9的表达之间具有正向相关性(P<0.01)。
(2)体外侵袭实验结果提示,E2和G-1可明显增加OVCAR5细胞侵袭的数量(P<0.05),PTX可明显抑制细胞的侵袭,干扰GPR30基因的表达后可侵袭细胞数量明显减少;Wound healing结果也表明:G-1可明显缩小划痕距离(P<0.05),E2次之(P<0.05),加入PTX的各组划痕愈合现象不明显,GPR30 siRNA加入后可明显抑制细胞的迁移(P<0.05);RT-PCR、Western blot和明胶酶谱结果显示,E2和G-1可使MMP-9 mRNA和蛋白表达增加、酶活性增强(P<0.05),PTX可明显抑制E2和G-1对MMP-9的上调作用。GPR30 siRNA转染可明显抑制MMP-9的表达及酶活性(P<0.05)。
结论:
(1)GPR30在上皮性卵巢癌中高水平表达,且与MMP-9的表达具有正相关性。提示GPR30可能与卵巢癌的侵袭和转移有关。
(2)细胞培养的结果表明GPR30可促进卵巢癌细胞的侵袭和转移,可能通过升高MMP-9的表达水平和增强MMP-9的酶活性而发挥促侵袭转移的作用。