【摘 要】
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目的:通过免疫组化实验及光学半定量实验,分析并研究胆道闭锁(Biliary Atresia,BA)患儿在不同纤维化分期阶段中,Notch信号通路元件的表达情况,初步探讨Notch信号通路表达变化与BA肝纤维化进展的关系。方法:收集40例行Kasai手术的BA患儿的临床资料及术中留存的肝组织样本;并选择先天性胆管扩张症(congenital biliary dilatation,CBD)和因非肝胆系
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目的:通过免疫组化实验及光学半定量实验,分析并研究胆道闭锁(Biliary Atresia,BA)患儿在不同纤维化分期阶段中,Notch信号通路元件的表达情况,初步探讨Notch信号通路表达变化与BA肝纤维化进展的关系。方法:收集40例行Kasai手术的BA患儿的临床资料及术中留存的肝组织样本;并选择先天性胆管扩张症(congenital biliary dilatation,CBD)和因非肝胆系统疾病死亡患儿尸检肝组织各5例对比研究。研究对象分为三组:(1)胆道闭锁组,共40例,女28例,男12例,手术日龄40～86天;(2)先天性胆管扩张症组,共5例,女3例,男2例,手术年龄1岁6个月～8岁;(3)对照组5例,女3例,男2例,年龄为1～4岁。胆道闭锁组则根据METAVIR分级标准(0级:无纤维化;Ⅰ级:肝门管区轻度纤维化;Ⅱ级:临近门管区轻度桥接纤维化;Ⅲ级:伸向临近门管区中度桥接纤维化;Ⅳ级:肝硬化,假小叶形成)细分为4个亚组,胆道闭锁患儿肝纤维化Ⅰ级一组,Ⅱ级一组,Ⅲ级一组,Ⅳ级一组,每组从样本库中随机选择10例组成前述胆道闭锁组。无肝病患儿正常肝组织标本为0级。进行免疫组化染色以观察肝组织Notch-1、Jagged-1、Hes-1的表达情况及进行半定量分析。结果:(1)免疫组化染色结果显示,无论是Notch-1、Jagged-1还是Hes-1,镜下均可观察到明显地随肝脏纤维化等级加重而加深的染色情况(具体结果详见后述)(2)半定量分析Notch-1、Jagged-1、Hes-1分别在对照组、CBD组和BA组的表达水平:Notch-1在BA组和CBD组表达增加,与对照组相比较差异具有统计学意义,BA组与CBD组组间差异无统计学意义;Jagged-1在BA组和CBD组表达增加,与对照组相比差异具有统计学意义,BA组与CBD组组间差异无统计学意义;Hes-1在BA组和CBD组表达增加,三组间比较差异有统计学意义。(3)半定量分析Notch-1、Jaggede1、Hes-1分别在BA亚组内的表达水平:Notch-1、Jagged-1、Hes-1的表达量随肝纤维化程度加重而增加,三组元件各自组间比较差异均具有统计学意义((2)、(3)具体数据比较及分析详见后述)结论:BA患儿肝脏组织中Notch信号通路异常活化,Notch-1、Jagged-1、Hes-1表达改变与胆道闭锁肝纤维化进展密切相关。Notch-1在肝细胞与HSCs间表达差异对肝纤维化进展的影响机制还需进一步探索,而Jagged-1/Hes-1的过表达导致肝内一系列的理化改变很有可能是导致BA患儿肝纤维化快速进展的原因之一。对于BA患儿,从发现胆道闭锁、施行Kasai手术到肝移植期间,肝与纤维化始终是持续进展的。如果可以从分子机制层面抑制、阻断甚至逆转纤维化的产生,那么将对BA患儿获得良好预后,维持自体肝生存,避免肝硬化乃至肝衰竭的发生产生巨大的帮助。从本研究结果来看,Notch信号通路可以作为一个潜在的治疗靶点来控制肝纤维化的发展过程,以期减缓肝硬化进程。
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