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目的:选择暴露于细菌表面并与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)定植密切相关的黏附素Hp1188为目标,通过基因工程技术获得纯化的重组黏附素蛋白Hp1188(recombinant Hp1188 protein, rHp1188),在体外和小鼠模型中评价其免疫特性及对H. pylori感染的免疫保护效果,以确定rHp1188在H. pylori疫苗研制中的应用价值。方法:①构建重组质粒pQE30-hp1188,DNA测序分析正确后,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。Ni2+-NTA树脂纯化表达蛋白,SDS-PAGE分析其纯度,Bradford法测定其浓度,Western blot分析其抗原特异性,双向免疫扩散检测其效价。②以纯化的rHp1188为抗原,建立检测血清H.pylori Hp1188抗体的间接ELISA法,与科研诊断标准比较评价其应用价值。③建立H. pylori感染小鼠模型,在该模型中评价rHp1188与黏膜佐剂霍乱毒素B亚单位(cholera toxin subunit B,CTB)结合预防H. pylori感染的效果:ELISA法检测血清和小肠黏液中抗Hp1188抗体产生情况;胃组织H. pylori培养和组织切片Giemsa染色观察细菌定植量的改变;HE染色检查免疫后小鼠胃黏膜的病理学改变。结果:①成功构建了重组质粒pQE30-hp1188,序列分析显示hp1188结构基因由810bp组成,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%,开放读码框完整无中断,编码269个氨基酸。SDS-PAGE显示表达产物相对分子量约30kD,可溶性表达占全菌蛋白的47%以上,纯化后获得纯度达90%的rHp1188,浓度为1.0mg/ml。兔抗rHp1188血清双向免疫扩散检测抗体效价为1:16;Western bolt结果显示该蛋白可被兔抗H. pylori全菌抗体识别,在30kD附近出现反应条带。②对临床血清标本的ELISA检测结果显示,Hp1188抗体检测的敏感性和特异性分别为87.5%和86.7%。③预防组小鼠在血清和肠黏液中检测到高水平抗体(IgG、IgA);胃组织H. pylori培养阳性率、H. pylori定植及炎症程度均明显低于阳性对照组(P<0.05)。预防组不仅可以减少H. pylori的定植,而且能减轻H. pylori造成的胃组织的局部炎症反应。结论:成功构建了基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,并高效表达了rHp1188,表达蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,在小鼠体内能阻止H. pylori的定植,有望作为H.pylori疫苗的一个备选抗原。