论文部分内容阅读
大豆异黄酮的生理活性主要来自于大豆异黄酮甙元，而游离型的大豆异黄酮甙元只占大豆异黄酮总量的1％。因此如何能将大豆异黄酮葡萄糖甙水解成为甙元，特别是利用产β-葡萄糖苷酶的微生物发酵水解大豆异黄酮葡萄糖甙成为近来大豆异黄酮研究的热点和重点。
本文研究了用HPLC测定两种大豆异黄酮甙元一大豆黄素和染料木黄酮含量的色谱条件(以甲醇-0.5％乙酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温为35℃，检测波长为260nm)，并检测了大豆和豆豉中两种甙元的含量。结果表明：大豆经发酵后，大豆异黄酮甙元含量明显提高。
依据上述实验结果，以豆豉为材料，选育高产β-葡萄糖苷酶的菌株。先经过筛选，得到一株产β-葡萄糖苷酶酶活力较高的细菌。然后将该菌经过UV、LiCl诱变，其酶活由0.26(OD值)提高到0.768(OD值)。对酶活力最高的诱变株(B.sp-7)的产酶条件优化，利用京尼平甙法和水杨苷法分别测得其在最佳产酶条件下(黄豆粉1％、酵母膏1％、麸皮2％、KH<,2>PO<,4>0.1％、NaCl0.5％、PH7.5、装液量：30ml/300ml三角瓶、发酵时间：48h、发酵温度：37℃、转速：70r/min)的β-葡萄糖苷酶酶活力分别为0.826(OD值)和5.49μg/ml。
同时，以细菌B.sp-7最佳产β-葡萄糖苷酶的条件为参考，优化了其产大豆黄素和染料木黄酮的发酵工艺条件(大豆黄素：麸皮0.5％，酵母膏0.2％，大豆0.5％，NaCl0.04％，K<,2>HPO<,4>0.1％，温度40℃，转速180r/min，装液量45m1/300ml，发酵时间48h；染料木黄酮：牛肉膏2％，蛋白胨0.2％，大豆0.5％，CaCl<,2>0.04％，ZriSO<,4>0.02％，K<,2>HPO<,4>0.1％，温度28℃，转速70r/min，装液量60ml/300ml，发酵时间48h)，通过HPLC检测发现：大豆经发酵后其大豆黄素和染料木黄酮的含量达到565.15 μg/g和1230.14μg/g，分别是未发酵大豆的5.31倍和7.93倍。