高原大鼠严重烧伤延迟复苏后氧化应激对小肠Peyer氏结淋巴细胞凋亡的影响

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目的:探讨高原地区大鼠严重烧伤延迟复苏后氧化应激反应对小肠Peyer氏结细胞凋亡的影响及氧化应激与凋亡相关基因表达的关系。方法:Wistar大鼠132只,分别在海拔1517m和海拔3848m两个海拔高度随机分为延迟复苏组(DFR,n=30)、即时复苏组(IFR,n=30)和假伤组(SG,n=6),建立TBSA 30%Ⅲ度烫伤模型,分别于伤后6h、12h、24h、48h和72h各取6只大鼠开腹取材,取回肠组织肠壁Peyer氏结,采用混合组织切片技术、TUNEL、TBA法、比色法、免疫组织化学染色技术与图象分析技术,观察Peyer氏结中淋巴细胞凋亡率及Bax、HIF-1α、CD3在Peyer氏结中的表达,检测丙二醛(MDA)和总巯基(TSH)在Peyer氏结中含量变化,观察了氧化应激与细胞凋亡的关系。结果:1.随海拔高度的增加,Peyer氏结滤泡生发中心较前扩大,可见炎性细胞浸润,凋亡细胞簇状分布在生发中心,凋亡细胞胞膜皱缩,胞核固缩,染色质团块聚集于核膜处:可见大小不一的凋亡小体,呈圆形或椭圆形,胞质浓缩。2.Bax阳性表达均位于Peyer氏结淋巴细胞的细胞核,阳性细胞胞核呈深棕色,各海拔高度其表达强度DFR组和IFR组均高于SG组,随海拔高度上升Bax表达增强,各海拔高度DFR组表达强度高于同海拔IFR组,在伤后6h和72h海拔3848m各实验组分别高于海拔1517m各实验组(P<0.05)。3.HIF-1α阳性表达均位于Peyer氏结淋巴细胞的细胞核,阳性细胞胞核呈深棕色,各海拔高度其表达强度DFR组和IFR组均高于SG组,随海拔高度上升HIF-1α表达增强,各海拔高度DFR组表达强度高于同海拔IFR组,在伤后6h和24h海拔3848m各实验组分别高于海拔1517m各实验组(P<0.05)。4.TUNEL阳性表达均位于Peyer氏结淋巴细胞的细胞核,阳性细胞胞核呈深棕色,各海拔高度其表达强度DFR组和IFR组均高于SG组,随海拔高度上升TUNEL表达增强,各海拔高度DFR组表达强度高于同海拔IFR组,海拔3848m各实验组分别高于海拔1517m各实验组(P<0.05)。5.CD3~+表达均位于Peyer氏结T淋巴细胞的胞浆或胞膜,呈棕黄色,各海拔高度其表达强度DFR组和IFR组均低于SG组,随海拔梯度上升CD3~+表达减弱,各海拔高度DFR组表达强度均低于IFR组,在伤后6h和24h海拔3848m各实验组分别低于海拔1517m各实验组(P<0.05)。6.MDA在Peyer氏结淋巴组织细胞含量,各海拔高度DFR组和IFR组均高于SG组,随海拔高度上升各海拔高度DFR组MDA的含量高于同海拔IFR组,在伤后12h~72h海拔3848m各实验组分别高于海拔1517m各实验组(P<0.05)。7.TSH在Peyer氏结淋巴组织细胞含量,各海拔高度DFR组和IFR组均低于SG组,随海拔高度上升各海拔高度DFR组TSH的含量低于同海拔IFR组,在伤后12h~72h海拔3848m各实验组分别低于海拔1517m各实验组(P<0.05)。8.在1517m DFR组细胞凋亡与HIF-1α、MDA的变化呈显著正相关(r分别为0.991,0.965,P<0.01)。结论:1.随海拔高度的增加,严重烫伤延迟复苏大鼠回肠组织Peyer氏结病理变化明显加重,凋亡细胞胞膜皱缩,胞核固缩,染色质边集,可见大小不一的凋亡小体;2.高原地区不同海拔高度严重烫伤延迟复苏大鼠回肠组织Peyer氏结细胞凋亡数量随海拔梯度升高而增加;3.Bax和HIF-1α可能参与了高原地区大鼠严重烫伤延迟复苏后肠Peyer氏结淋巴细胞的凋亡调控过程;4.MDA和TSH的含量变化表明,在高原地区大鼠严重烫伤延迟复苏后小肠Peyer氏结中发生严重的氧化应激反应,可能是Peyer氏结淋巴细胞凋亡增加的重要原因之一;5.CD3~+ T淋巴细胞的减少可能是高原严重烧伤延迟复苏后肠道细胞免疫功能抑制的重要原因之一。
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