嗅鞘细胞移植促进急性脊髓损伤再生的实验研究

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大量实验证明嗅鞘细胞(OEG)移植能促进脊髓损伤神经纤维的再生。OEG促进脊髓再生的作用是通过在损伤段为再生神经纤维形成髓鞘和分泌一些促进脊髓损伤再生的因子而实现的。以前实验主要是研究OEG对脊髓横断、半切和电极致伤的促进作用,而研究OEG对临床常见的脊髓挫伤的修复作用研究较少。因为单纯挫伤可能有神经纤维的残留,其神经恢复无法区别是否为OEG的作用,所以在脊髓损伤区做横切,这样可保证神经纤维全部断裂。目的:研究OEG无血清培养下的生长特性和OEG移植后在体内存活情况,以及对大鼠脊髓挫伤加横断伤的修复作用。方法:1.细胞培养:新生Wistar大鼠嗅球(OB)做OEG原代培养,然后利用无血清培养基添加一些促进生长的微量物质做纯化培养,为OEG提供了合适的生长环境而大量增殖。由于神经元依赖血清生长而被去除,而使细胞成分相对单一化。利用中枢神经系统中仅有OEG细胞表现为神经胶质元纤维酸性蛋白(GFAP)和低亲和力神经生长因子受体(P75或L-NGFR)免疫染色双阳性的特性,鉴定OEG。2.动物实验:四月龄Wistar大鼠,体重240-260g。用NYU脊髓打击器以250gmm能量打击T9-10段脊髓,致脊髓挫伤,在挫伤区中间横行完全切断脊髓,A组(20只)在损伤远近端注射Hoechst标记的OEG,B组(20只)在相同位置注射DMEM培养液。C组(10只)单纯做T9-10节段的椎板减压。术后观察动物脊髓功能恢复情况, 每两周测定一次后肢运动功能(BBB评分法),共12周。术后三个月取损伤段及其临近脊髓标本,做HE染色、嗜银染色和抗NF免疫组化染色,同时荧光显微镜下观察Hoechst标记的OEG在体内存活情况。结果:1.通过无血清纯化培养,OEG增殖迅速,原代培养9天,细胞数目可达16倍以上,纯<WP=9>度可达85%。2.手术后4周开始有运动功能恢复,A组运动功能好于B组。在各个时间段BBB运动功能得分A组均高于B组。比较12周时两组BBB得分,差异明显(P(0.001)。3. A、B组都有神经纤维进入损伤区,排列紊乱数量不等。在损伤近端,神经纤维数量A组多于B组(P(0.001),但都少于相应节段的C组(P(0.001)。4.A组损伤远端神经纤维数量比损伤近端少(P(0.001),而B组损伤远端几乎没有神经纤维。5.荧光显微镜下观察到Hoechst标记的OEG大量存在于脊髓损伤段周围,最远可到距离损伤区边缘2cm处。6.统计学分析表明,脊髓损伤再生神经纤维的数量与运动功能恢复之间存在正相关(r=0.9816)。结论:1. 无血清纯化培养法是一种相对简单易行、费用低廉,增殖迅速,可获得较高纯度OEG的培养方法。2. OEG植入体内可以长时间存活,并有自我迁移能力。3. OEG移植具有明显促进脊髓挫伤加横断伤神经纤维再生和功能恢复的作用。
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