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海洋贝类的多糖成分可抑制肿瘤周围血管生成,同时可提高作用对象的自身免疫能力。马氏珠母贝具有抑制某些肿瘤细胞增殖的作用,其作用成分为糖胺聚糖(Glycosaminoglyean,GAG),该成分对体内、外的肿瘤细胞具有直接杀伤作用。但其抗肿瘤机制尚未完全明了。近年研究发现,许多海洋生物的糖胺聚糖能诱导肿瘤细胞凋亡,并能使肿瘤细胞发生细胞周期阻滞,抑制肿瘤细胞增殖。因此,珠母贝的提取物糖胺聚糖的抗肿瘤作用可能也是通过诱导肿瘤细胞凋亡,影响细胞的生长周期来实现的。
目的:
研究以马氏珠母贝的提取物糖胺聚糖诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的作用及其对细胞周期的阻滞作用。
方法:
采用MTT法检测马氏珠母贝糖胺聚糖对人宫颈癌Hela细胞、小鼠白血病L1210细胞和人慢性粒细胞白血病K562细胞生长的抑制作用。应用倒置显微镜、倒置荧光显微镜观察人宫颈癌Hela细胞凋亡的形态学特征,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂片段,流式细胞仪定量检测细胞凋亡的百分率及对其周期的影响。
结果:
MTT法显示马氏珠母贝糖胺聚糖纯化级分GAG-1、GAG-2(加药终浓度为10μg·ml<-1>,25μg·ml<-1>,50μg·ml<-1>,100μg·nl<-1>)和阳性药物联合用药12h、24h可抑制人宫颈癌Hela细胞、人慢性粒细胞白血病K562细胞和小鼠白血病L1210细胞的增殖活性,其抑制效果呈时间、浓度依赖性。以24h、100μg·ml<-1>GAG-2抑制Hela细胞作用最强。
以珠母贝GAG-2诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡,倒置显微镜和荧光倒置显微镜可见凋亡细胞的形态学改变:细胞质边聚、核固缩,有凋亡小体产生。
经珠母贝GAG-2诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳显示特征性的梯状条带,GAG-2作用Hela细胞12h,电泳呈现200~2000bp不等的DNA片段。流式细胞术发现珠母贝GAG-2可使Hela细胞阻滞于G<,1>期,以24h、100μg·ml<-1>阻滞作用最为显著(P<0.05),凋亡指数为42.6%。
结论:
马氏珠母贝糖胺聚糖GAG-2可诱导Hela细胞的凋亡,并使细胞周期阻滞于G<,1>期。