致断奶仔猪腹泻和水肿病大肠杆菌F18菌毛单克隆抗体的研究及其初步应用

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以表达F18ab菌毛参考菌株107/86(O139∶K12∶H1)为研究对象,找出了F18ab菌毛表达的最佳条件,采用热洗脱法使菌毛脱落,经硫酸铵沉淀,透析后进行蔗糖密度梯度离心收集相应的条带,经SDS-PAGE鉴定,获得了较纯F18ab菌毛,其主要亚单位分子量约为15kD;将提纯的F18ab菌毛免疫BALB/C小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,经三次融合,用自行建立的检测方法共筛选出4株能稳定分泌针对F18ab菌毛的特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株4G8、4H10、4A2和3A12,腹水单抗的直接凝集价最高可达1∶3200。直接凝集试验结果显示:4株单抗只与表达了F18ab菌毛的参考株107/86发生凝集反应,而与表达了F18ac菌毛参考菌株8199(O141ab∶H4)以及猪源产F4、F5、F6和F41粘附素菌株和F18菌毛阴性菌株LC-2α、HB101、TG1及沙门氏菌不发生凝集反应;免疫印迹试验表明:腹水单抗4G8、4H10、4A2和3A12均可特异识别F18ab菌毛15KD左右的主要亚单位多肽,而不能识别8199表达的F18ac菌毛的主要亚单位多肽,可初步认为所研制的单抗针对的抗原表位是F18ab菌毛的b因子。间接免疫胶体金试验结果表明:4株单抗是特异性地针对F18ab菌毛的,胶体金标记的4株单抗与F18ab菌毛化菌体作用后,在电镜下可见金颗粒在菌毛表面呈不规则地分布。 应用我们所研制的单抗对11个猪水肿病分离株F18ab菌毛进行了检测,结果显示:上述分离株中F18ab菌毛的出现率为72.7%(8/11),检出的F18ab菌毛阳性分离株的O血清型均为O139。
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