论文部分内容阅读
硝克柳胺[3-（3′-羧基-4′-羟基苯胺羰基）-6-硝基-7-羟基-8-甲基香豆素]是由中国医学科学院药物研究所研制、具有我国自主知识产权的治疗肾功能不全药。药理研究表明，该药是肾素和TGF-β1Ⅱ型受体双靶点抑制剂，对肾切除、糖尿病肾病以及高血压大鼠肾损伤等模型引起的急、慢性肾衰均有明显的改善作用。其保护作用机制与抑制肾素活性，降低体内AⅡ水平，减少TGF-β1合成，抑制TGF-β1Ⅱ型受体磷酸化，减轻Smad通路所致间质纤维化密切相关。本论文通过研究硝克柳胺在大鼠和Beagle犬体内的药代动力学特性及生物转化途径，确定硝克柳胺在大鼠和人肝微粒体的代谢产物和参与代谢的药酶类型，了解硝克柳胺与药物代谢酶的相互作用，为临床应用提供参考依据。雄鼠口服不同剂量硝克柳胺（30、100、300mg／kg）后5min血中即可检测到原形药，达峰时间为20min～2h，达峰浓度分别为1011.4，1908.1，4055.0ng／ml。雌鼠给药后1min血中即可测到原形药，达峰时间为3～20min，达峰浓度分别为270.4，728.4，1295.7ng／ml，明显低于雄鼠。雌、雄大鼠血药达峰浓度均与剂量呈正比。血浆药时曲线经非房室模型计算，雄鼠低、中、高剂量组的AUC分别为7380.9，13370.8，32803.1ng／ml·h，雌鼠分别为695.6，2326.4，3940.1ng／ml·h，AUC与给药剂量呈正比，但雌鼠AUC明显小于雄鼠。雄鼠三个剂量组的MRT均为5.8h，雌鼠MRT分别为3.0h、3.7h和3.8h，明显短于雄鼠。雌、雄大鼠MRT均不随剂量增加而延长。硝克柳胺在大鼠体内代谢呈线性动力学过程，药物白雌鼠体内吸收和消除均明显快于雄鼠。雄鼠口服硝克柳胺的生物利用度为1.34％，雌鼠为0.67％。雄性Beagle犬口服不同剂量硝克柳胺（30、100、300mg／kg）后3～20min血中即可检测到原形药，达峰时间为6min～3h不等，达峰浓度分别为123.5，153.6，136.7ng／ml。雌性Beagle犬口服给药后3～20min血中可检测到原形药，达峰时间为20min～1h，达峰浓度分别为33.5，158.3，110.2ng／ml。雄、雌血药达峰浓度与剂量不呈正比。Beagle犬各剂量组药时曲线经非房室模型计算，雄犬低、中、高剂量组AUC分别为109.5，448.4，1846.8ng／ml·h，雌犬AUC分别为110.7，468.6，1907.8ng／ml·h，AUC与给药剂量基本呈正比。雄犬MRT分别为1.4h、4.3h和12.1h，雌犬MRT分别为1.6h、3.2h和12.8h，MRT随剂量增加而明显延长。上述结果提示，硝克柳胺单次给药后在Beagle犬体内的吸收和消除存在饱和现象。与单次给药相比，雌雄Beagle犬多次口服硝克柳胺（100mg／kg）后AUC分别增加5.4和4.3倍，MRT延长3.2和2.4倍，Cmax增加30％和21％。结果提示，多次给药后硝克柳胺在Beagle犬体内有蓄积倾向。雄鼠口服硝克柳胺（30mg／kg）10min后，组织和器官中药物浓度排序为：胃＞脂肪＞附睾＞肌肉＞小肠＞肾上腺＞睾丸＞肺＞肾＞肝脏＞心脏＞脾＞脑。给药后120min、480min的药物分布与10min基本相似，脑中药物含量降至检测限以下。雌性大鼠给药后3min，各组织药物浓度排序为：胃＞肾上腺＞小肠＞卵巢＞肺＞脂肪＞子宫＞脾＞肌肉＞脑＞肾＞心脏＞肝脏，60min时肝脏分布出现高峰，360min后脑、肺、肾、肾上腺中药物含量均降至检测限以下。硝克柳胺在大鼠脂肪、卵巢、附睾、肾上腺等组织中药物分布较高，靶器官-肾脏以及脑组织中药物分布相对较少。雄鼠口服硝克柳胺后6h尿排出量占总排泄量的73％，24h排出约92％，48h排出约99％，尿排泄量占给药量0.032％。雌鼠口服给药后2h尿排出量占总排泄量的67％，12h排出90％，48h排出100％，尿排泄量占给药量0.006％。雄鼠口服硝克柳胺后24h粪排出量占总排泄量86％，粪排泄总量占给药量18％。雌鼠24h粪排泄占总排泄量97％，粪排泄总量占给药量21％。雄鼠口服硝克柳胺后4h自胆汁排出量占总排泄量的57％，12h排出93％，48h排出100％，胆汁排泄量占给药量0.5％。雌鼠口服给药后4h胆汁排出量占总排泄量43％，12h排出68％，48h排出98％，胆汁排泄量占给药量2％。硝克柳胺与大鼠和人血浆蛋白结合率约为100％。硝克柳胺经大鼠和人肝微粒体温孵的主要代谢产物（XLF-1）为硝基还原产物[3-（3′-羧基-4′-羟基苯胺羰基）-6-氨基7-羟基-8-甲基香豆素]，分子量为370，分子式为C18H14N2O7。大鼠体内（血浆、尿液、胆汁及肝组织）主要代谢产物与XLF-1一致。大鼠口服硝克柳胺后的血浆、尿液、胆汁经β-葡萄糖醛酸甙酶、硫酸酯酶水解后未发现其它代谢产物，也未见硝克柳胺含量变化，推测硝克柳胺在体内极少以上述结合物形式存在。硝克柳胺在大鼠肝脏的还原反应可经两个不同的酶系统催化，存于微粒体的代谢酶包括NADPH-cytochrome c还原酶、cytochrome b5还原酶和CYP2C6，该代谢主要是依赖NADPH的酶促过程。另一系统存于胞浆，包括NAD（P）H脱氢酶和黄嘌呤氧化酶，其中以黄嘌呤氧化酶为主。硝克柳胺经CYP1A2，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1，CYP3A4代谢的可能性较小。硝克柳胺在小肠组织代谢速率最快，其次为脂肪与肝组织。厌氧条件下硝克柳胺与肠道菌群温孵2h可代谢50％，提示肠道菌群参与硝克柳胺的代谢。因此，硝克柳胺易被肠道菌群代谢，在小肠组织、肝组织代谢快可能是硝克柳胺经大鼠口服后生物利用度较低的主要原因。硝克柳胺给药三次（30mg／kg，qd×3）对大鼠肝微粒体蛋白和CYP450总量无明显影响，对CYP3A4、CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1、CYP2C19也无明显诱导作用。硝克柳胺（50μM）体外对CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4也无明显抑制作用，对CYP2C19的轻微抑制作用无明显临床意义。硝克柳胺口服给药三次对大鼠肝脏GST和UDPGT活性也无明显诱导和抑制作用。