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目的:探讨天然免疫成分TLR3/TRIF及其信号分子、树突状细胞(dendritic cell,DC)在小鼠乙型肝炎病毒相关性肾炎(hepatitis B virus associated glomerulonephritis,HBV-GN)模型中的表达变化,初步分析HBV-GN的天然免疫发病机制,为HBV-GN的治疗提供新靶点。方法:(1)模型的建立、分组:纯系BALB/c小鼠21只,体重18-20g,建立小鼠HBV-GN模型,模型建立成功后,将模型组小鼠(剩余18只)分为3组(每组6只),分别为模型对照组(B组)、恩替卡韦组(C组)、恩替卡韦联合吗替麦考酚酯组(D组)。同时选取9只健康雄性BALB/c小鼠为正常对照组(A组)。A组及B组给予生理盐水灌胃,C组给予恩替卡韦灌胃,D组给予恩替卡韦联合吗替麦考酚酯灌胃,连续1个月后处死小鼠。(2)判断模型建立是否成功:造模过程中每周2次用试纸条法检测小鼠尿蛋白情况,从临床角度证实小鼠已发生肾损害。造模结束后随机取3只模型小鼠及3只健康小鼠处死,取肾组织分别行HE、PAS染色,同时检测肾组织中HBsAg的存在情况,从病理学角度证实小鼠患有HBV-GN。(3)小鼠建模成功并干预结束后,利用Western blot及实时荧光定量PCR检测Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIR-domain containing adaptor inducing interferon-β,TRIF)、干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3,IRF3)、β干扰素(Interferon-β,IFN-β)各蛋白及m RNA的表达变化。(4)利用流式细胞分析术检测各组肾组织中DC的相对表达变化。结果:(1)从造模的第二周开始,小鼠开始出现尿蛋白,至第四周末尿蛋白达+++,健康雄性BALB/c小鼠尿蛋白始终为阴性;模型组肾组织内HE染色可见大量炎症细胞浸润,PAS染色可见肾小球系膜细胞和系膜基质增生。而且模型组小鼠肾组织HBsAg免疫荧光染色可见HBsAg沿肾小球系膜区呈颗粒状沉积,而健康小鼠肾组织中未见HBsAg的沉积。(2)与A组相比,B、C、D组肾组织中TLR3、TRIF、IRF3、IFN-β蛋白及mRNA相对表达量均上调(P<0.05),B组与其他三组相比,上述各蛋白及mRNA的相对表达量亦上调(P<0.05),C组与D组相比,各蛋白及mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。(3)DC的变化同上述各蛋白及mRNA相对表达变化一致,B组高于其余三组(P<0.05),A组低于其余三组(P<0.05),C组与D组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)通过向BALB/c小鼠腹腔注射乙肝患者血清可成功构建乙肝肾小动物模型;(2)HBV感染机体后可能通过复制过程中产生的ds RNA与DC上的TLR3结合,从而激活TLR3/TRIF信号通路及刺激DC的成熟,导致一系列免疫炎症反应及免疫失衡,最终引起肾组织损害。(3)这些发现可以从天然免疫角度为HBV-GN的治疗提供新策略。