论文部分内容阅读
HBV引起的慢性感染每年都导致数十万人死亡，是严重威胁人类健康的一大因素。目前的抗HBV药物包括核苷类似物和干扰素都存在耐药性或副作用的问题。因此，亟需在充分了解HBV复制机制的基础上，开发新型的抗HBV药物。病毒聚合酶(polymerase，P protein)在一系列分子伴侣(chaperones)的协助下，与核衣壳包装信号epsilon(ε)的相互作用是HBV复制周期中的关键步骤，这一作用在启动pgRNA(pregenomic RNA)包装(encapsidation)的同时也起始病毒基因组DNA的逆转录过程。因此阻断该步骤，HBV的复制必然得到抑制，这为新型抗HBV药物的开发提供了极具价值的靶点。由于HBV体外pgRNA包装并重建蛋白priming系统的缺乏，对这一过程的的深入认识仍有欠缺。然而最近，这一瓶颈的突破，为我们深入研究P-ε相互作用过程提供了契机。
本文通过一系列突变实验证明了在P-ε相互作用过程中起到关键作用的两个位点（M1和M3）。定点突变M1和M3后，发现在病毒核衣壳内检测不到病毒DNA以及RNA，表明M1和M3位点的改变影响pgRNA的包装，从而导致HBV基因组无法复制。同时，体外P和ε的结合以及蛋白priming的实验结果表明，M1和M3氨基酸残基的变化对于P蛋白与ε的结合能力无影响，但是会导致蛋白priming活性的丧失。这一结果直接证明在体外环境中，M1和M3对于维持P-ε相互作用是不可或缺的。目前用于治疗HBV感染的核苷类药物主要针对P蛋白的催化活性中心，而本研究中发现的这两个作用位点却远离催化活性中心，有望针对这一靶点开发出一种新型的抗HBV药物，而且有可能降低耐药突变株产生的风险。