论文部分内容阅读
目的:化疗后的外周血粒细胞低下是临床治疗中的棘手问题,常导致治疗延迟、终止。但骨髓涂片检查发现,化疗后相当多的粒细胞减少患者之骨髓造血细胞增殖并非低下、而为活跃,故推测此时外周血粒细胞数量减少的另一原因可能为骨髓分叶核白细胞(Bone marrow polymorphonuclear leukocyte, BM PMNL)不能及时释放。有实验提示BM PMNL表达的L-选择素(L-selectin)可能参与了其从骨髓释放到外周血的过程,为了从数量和功能上探讨其与释放的相关性以及化疗后骨髓释放PMNL的影响因素,并比较临床常用升粒细胞药物粒细胞刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF),地塞米松(dexamethasone, DXM)及中药提取物黄芪多糖(astragalus-polysaccharide, APS)影响PMNL释放的分子机制,我们进行了此项研究。方法:大鼠(180-230g)按体重随机分为空白对照组(生理盐水0.4ml/d,d-2-11),化疗组(环磷酰胺,40mg/kg d0-1腹腔给药),黄芪多糖组(环磷酰胺,40mg/kg d0-1腹腔给药;黄芪多糖,100mg/kg d-2-11静脉推注(Ⅳ)),粒细胞刺激因子组(环磷酰胺,40mg/kg d0-1腹腔给药;粒细胞刺激因子10μg/kg d2-5皮下注射(IH))和地塞米松组(环磷酰胺,40mg/kg d0-1腹腔给药;地塞米松0.5mg/kgd2Ⅳ)。每组分别于化疗用药的d-2,d4,d7,d10和d14处死并取外周血、提取骨髓细胞,从外周血及骨髓细胞中经Percoll液的梯度分层分离出外周血及成熟骨髓粒细胞(即杆状核和分叶核骨髓细胞),并评估这些细胞对酵母聚糖活化的胎牛血清(zymosan-activated serum, ZAS)的趋化迁徙能力。经流式细胞术测定不同药物干预组不同时间点成熟的骨髓粒细胞上粘附分子L-selectin,配体(中文名)PSGL-1,水解酶ADAM17及介导稳定粘附的整合素CDllb/CD18的表达水平。同时分类计数骨髓涂片中band and segmented BM cells及外周血涂片中PMNL占总白细胞的百分比。结果:化疗7天后骨髓HE染色提示骨髓细胞增生活跃、外周血涂片计数PMNL百分比渐恢复,mature BM granulocytes上L-selectin、PSGL-1、CD11b/CD18及ADAM17的表达水平均降低明显,且趋化能力明显减低。APS、G-CSF、DXM均能不同程度改善化疗后外周血PMNL百分比、mature BM granulocytes上L-selectin信号通路分子表达,其中黄芪多糖,地塞米松组在化疗第7天后明显优子粒细胞刺激因子组(P<0.05)。黄芪多糖能很好地改善化疗后骨髓成熟粒细胞及外周血PMNL的趋化能力,较粒细胞刺激因子和地塞米松作用显著(P<0.05)。骨髓细胞涂片显示黄芪多糖,粒细胞刺激因子,地塞米松组中杆状核及分叶核粒细胞占粒系细胞的比例均呈逐渐上升趋势,其中各时间点黄芪多糖和地塞米松组均较化疗组升高(P<0.05),并在第10、14天达正常水平(P>0.05vs.空白对照组,P<0.05vs.粒细胞刺激因子组);而粒细胞刺激因子组比化疗组低但不具有统计学意义。结论:大鼠化疗7天后骨髓存在“优质”成熟粒细胞释放障碍。黄芪多糖不仅促进骨髓粒系的增殖分化,也能上调骨髓成熟粒细胞释放过程中介导初始粘附的L-selectin及其配体PSGL-1、介导稳定粘附的整合素CDllb/CD18和脱落酶ADAM17的表达水平,促使PMNL释放;并能明显提高化疗后骨髓成熟粒细胞及外周血PMNL的趋化抗炎能力,其效能较粒细胞刺激因子和地塞米松强。