【摘 要】
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临床研究表明,癌症的早期诊断对降低癌症患者的死亡率及改善预后具有非常重大的意义。目前,肿瘤标志物的检测在癌症早期诊断中展现出广阔的应用前景。电化学发光免疫分析技术是电化学发光和免疫测定相结合的产物,其特异性强,重复性好,易于自动化是目前最先进的标记免疫测定技术之一,适用于肿瘤标志物的检测。在众多发光体中,联吡啶钌(Ru(bpy)32+)因其水溶性好、发光效率高以及可电化学再生等特点而受到广泛关注。
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(21505063); 山东省自然科学基金(ZR2018BB059,ZR2017BB084);
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临床研究表明,癌症的早期诊断对降低癌症患者的死亡率及改善预后具有非常重大的意义。目前,肿瘤标志物的检测在癌症早期诊断中展现出广阔的应用前景。电化学发光免疫分析技术是电化学发光和免疫测定相结合的产物,其特异性强,重复性好,易于自动化是目前最先进的标记免疫测定技术之一,适用于肿瘤标志物的检测。在众多发光体中,联吡啶钌(Ru(bpy)32+)因其水溶性好、发光效率高以及可电化学再生等特点而受到广泛关注。但是Ru(bpy)32+需要在高正电位或负电位下发光,会带来一系列不必要的副反应,如水的析氢/析氧反应及对修饰电极和生物分子的电化学损坏。本论文基于石墨烯-离子液体-铂纳米复合材料(GN-IL/Pt)的电催化活性开发了Ru(bpy)32+在较低电位下的发光,并制备了电化学发光免疫传感器,用于检测癌胚抗原(CEA)。主要内容如下:1.基于联吡啶钌的低电位电化学发光构建癌胚抗原免疫传感器实验发现,在-0.2~0.3 V的电位范围内,以草酸钠为共反应剂时,Ru(bpy)32+在GN-IL/Pt上可以产生较强的电化学发光(ECL)。该ECL的发光电位较低,有利于生物分子的检测,基于此构建了免标记的免疫传感器用于CEA的检测。在CEA存在时,形成的免疫复合物的导电性较差,使得ECL信号降低,实现了CEA的灵敏检测。在0.1 pg m L-1~100 ng m L-1范围内,该免疫传感器的ECL强度与CEA浓度的对数呈线性关系,线性回归方程为IECL=-695.25logc CEA+12088.79,相关系数R为0.9986,检测限达0.01 pg m L-1(S/N=3)。此外,该传感器具有良好的选择性、稳定性和重复性,对实际样品检测获得满意的结果。这项工作为开发新型低电位激发ECL系统提供了新视野,具有潜在的临床应用价值。2.基于MoS2纳米花构建信号猝灭型联吡啶钌低电位电化学发光免疫传感器实验发现,与GN-IL/Pt相比,Ru(bpy)32+在石墨烯-离子液体-铂钯纳米复合材料(GN-IL/Pt Pd)上可产生更强的ECL,这源于Pt与Pd之间的协同效应,增强了GN-IL/Pt Pd的电化学性能。同时通过水热合成法合成了MoS2纳米花(MoS2 NF),并发现其对Ru(bpy)32+的ECL具有猝灭效果。基于此,构建了“三明治”结构的免疫传感器,用于CEA的灵敏检测。在1 fg m L-1~1 ng m L-1范围内,该免疫传感器的ECL强度与CEA浓度的对数呈线性关系,线性回归方程为IECL=-989.50logc CEA+10409.93,相关系数R为0.9993,检测限达0.33 fg m L-1(S/N=3)。该传感器具有出色的选择性、稳定性和重现性,对实际样品检测获得满意的效果,有望应用在CEA的临床检测中。
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