萝卜过氧化物酶基因RsPrx1在酵母中的表达、纯化及鉴定

来源 :河南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong494
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
过氧化物酶在植物体内主要有两方面的作用,一方面与植物正常的形态发生和建成有关,在植物的生长、发育过程中起作用;另一方面与植物的抗逆性有关,包括抗旱、抗寒、抗盐和抗病等,是植物保护酶系中重要的保护酶之一。本研究从成熟心里美萝卜肉质根的皮中提取总RNA,采用RT-PCR方法得到RsPrx1的cDNA片段,将其克隆到pGEM-T载体中,经测序鉴定为全长编码基因。生物信息学研究表明RsPrx1的转录后加工符合典型的植物基因加工方式。之后构建毕赤酵母重组表达载体pPIC9KH-RsPrx1,测序表明RsPrx1正确插入α分泌信号开放读码框的下游。将其转化毕赤酵母GS115。转化后的酵母菌株经MD平板筛选后得到阳性重组子,将这些阳性克隆分别用诱导表达培养基BMMY诱导表达,成功分泌表达出具有生物活性的外源过氧化物酶。 外源基因在毕赤酵母中的表达受不同的培养条件影响,因此本研究对表达条件进行优化,得到重组毕赤酵母表达RsPrx1的最佳发酵条件是:以BMMY和BMGY为发酵培养基,培养基起始pH值为7.4,甲醇浓度0.5%,温度26℃,通气面积1.5cm2:为快速且高效地获得分泌表达的RsPrx1蛋白,采取更换培养基的方法,其间只须在达到最大酶活时更换新鲜的诱导表达培养基,经过氧化物酶活性测定发现这种诱导培养方法获得的总酶活是一般的连续培养(只添加YP)的2.59倍;SDS-PAGE分析表明诱导重组质粒表达了融合蛋白,分子量为37KD,与氨基酸序列计算结果一致;活性电泳检测表明重组毕赤酵母表达出来的是具有生物活性的RsPrx1;分别用不同浓度的NaCl和H2O2处理重组毕赤酵母转化子,发现转化子具有一定的抗盐和抗氧化胁迫能力。本研究建立了RsPrx1的重组毕赤酵母表达体系,建立了真核表达具有生物活性的外源过氧化物酶的有效方法,为进一步研究外源POD的性质和功能奠定了基础。
其他文献
数字摄影测量被广泛的应用于从二维数字影像提取地物三维空间目标的几何属性信息。影像匹配是数字摄影测量中的一项关键技术,是计算机视觉、图像配准、物体识别的研究热点。
该文介绍的全开放式的符号设计,采用面向对象的系统设计与实现方法,应用Visual C++ 6.0开发而成,其界面友好,操作方便,功能强大;同时采用参数化的数据结构和高精度几何数据组
近海海域海况复杂多变,湖汐不但受外海能量输入的控制,而且在复杂的海岸线、浅海海底和内陆河流运输的作用下变得异常复杂.卫星测高由于受复杂的海洋动力环境和陆地反射的影
空间模式是介于空间原型和空间模型之间的研究领域,其目标是解释空间现象和空间过程、探索地理学的方法论范式.空间模式测度是研究空间模式的核心内容,是许多专题研究感兴趣
该文以SVG在WebGIS中的应用为研究重点,通过对WebGIS实现方法问题的深入探讨.设计了SVG文件结构下的地理空间数据的组织方式,和自动实现这种数据组织的转换途径,设计了符合We
该论文的研究目的是利用正在迅速发展的掌上电脑,结合地籍测量数据采集工作的特点,研究开发基于个人数字助理(PDA)等嵌入式产品的地籍测量数据采集系统.该论文研究主要涉及计
  本文旨在研究是否可以通过改变一号专用设备分流体结构的方法和制定新的装配工艺来减少装配过程中冗余的动作,节约生产时间,提高工作效率。根据平均值法分析实验数据,继而在
该文首先阐述了林业资源数据空间可视化的重要性,分析了国内外在林业资源数据空间可视化方面发展和研究的现状,论述了林业资源可视化的必要性,总结出了林业资源数据与基础测
背景:  苯(Benzene)被普遍应用于工业生产和日常生活,污染无处不在,暴露难于避免。长期慢性苯暴露可以引起进行性骨髓退变、造成再生障碍性贫血,甚至是白血病。长期以来职业性
  端面磨削加工会产生较高的能量,而这些能量主要以热量的形式集中在工件表层及亚表层。由于磨削温度会造成工件表面出现变质层和磨削烧伤现象。本文通过对磨削温度进行理论