SiRNA抑制EGFR基因表达对食管鳞癌细胞株Eca109放射敏感性的影响

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目的:探讨用小干扰RNA(siRNA)抑制EGFR基因表达以提高食管鳞癌细胞Eca109的放射敏感性。方法:化学合成3种序列EGFR siRNA (EGFR siRNA1、EGFR siRNA2、EGFRsiRNA3),设随机序列阳性SiRNA组、随机序列阴性siRNA组、空白对照组,通过脂质体转染法转入Eca109细胞。以CCK8法检测细胞增殖,采用RT-PCR和Western blot检测干扰前后的食管癌Eca109细胞EGFRmRNA和蛋白表达。用细胞克隆形成实验分析EGFR siRNA联合X线照射对Eca109细胞的放射敏感性影响。结果:EGFR siRNA1、EGFR siRNA2、EGFR siRNA3转染Eca109细胞后的EGFRmRNA的阳性表达率为26.74%、9.52%、4.61%,较空白对照组的42.44%明显下降(p <0.0001),EGFR siRNA3对Eca109细胞EGFR mRNA表达抑制率可高达85%;EGFR siRNA1、EGFR siRNA2、EGFR siRNA3转染后Eca109细胞后的EGFR蛋白的阳性表达率为24.05%、34.91%、34.14%,较空白对照组的78.57%明显下降(p<0.0001),EGFR siRNA1对Eca109细胞EGFR蛋白表达抑制效率可高达72.84%;CCK8实验显示siRNA3干扰EGFR后Eca109细胞生长受到抑制,增殖抑制率为28.2%;成克隆分析的EGFR siRNA3转染Eca109细胞加照射细胞组D0,Dq,SF2值均低于单纯照射细胞组,放射增敏比(SER)为1.50。结论:EGFR siRNA转染Eca109细胞后能有效抑制EGFR基因表达,提高其放射敏感性。
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