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目的本文通过建立红藤水提物的高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromaterygraphy,HPLC)的分析方法,采用人单核巨噬细胞U937细胞经过脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)刺激模拟疾病炎症过程,观察红藤水提物的治疗效果,探讨红藤水提物对炎症反应的调控作用,为临床治疗疾病提供实验支持。方法1.使用HPLC法检测红藤水提物中红景天苷、芦丁的含量,建立红藤水提物成分的HPLC分析方法,达到质量控制目的。2.采用LPS诱导模拟炎症反应,Real-time PCR法检测NRF2及炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10 的 mRNA 表达;Western Blot 来检测 NRF2/ARE 信号通路中 NRF2、Keapl 及 HO-1 和 Akt/NF-κB 信号通路中的 NF-κB p65、IKK、IκB 表达以及 Akt、p38MAPK、ERK1/2、JNK的活化水平;免疫荧光法检测NRF2的核转位。结果1.HPLC法检测红藤水提物中的红景天苷1.059mg/g,芦丁的含量为0.5611 mg/g。2.Real-time PCR法显示,与对照组相比,LPS 1μg/mL组中的炎性细胞因子因子TNF-α、IL-1β、IL-10表达上升;与LPS 1μg/mL组相比,红藤水提物干预后TNF-α、IL-1β、IL-10表达下调,呈浓度依赖性。3.Western Blot法和Real-time PCR法实验结果显示,与LPS 1μg/mL组相比较,红藤水提物1 mg/mL和2mg/mL干预后的NRF2,HO-1的表达增加,Keapl的表达明显降低,呈浓度依赖。在1 h、3 h中,与对照组相比,LPS 1 μg/mL组的NRF2表达增加;与LPS 1 μg/mL组相比,红藤水提物1 mg/mL组中的NRF2表达明显减少;在6 h、12 h、24 h中,与LPS 1 μg/mL组对比,红藤1 mg/mL组中的NRF2的表达量上升。在红藤水提物干预24 h中,与LPS 1 μgg/mL组相比较,红藤水提物1 mg/mL组中的Keap1表达减少,呈时间依赖性。在12 h、24h中,与LPS 1 μg/mL组对比,红藤水提物1 mg/mL组的HO-1表达增加。在核转位的实验中,观察到LPS 1 μig/mL组中NRF2的核转位明显低于对照组和红藤1 mg/mL组。4.Western Blot法显示,与对照组相比,在3 h、6 h中,LPS 1 μg/mL组的NF-κB p65、IKK、IκB表达上调;与LPS 1 μg/mL组相比,红藤水提物1 mg/mL组的NF-κB p65、IKK、IκB的表达下调;在12 h的LPS 1 μg/mL组和红藤水提物1 mg/mL组的NF-κB p65、IKK、IκB的表达相反,即LPS模型组中NF-κBp65、IKK、IκB的表达下调,红藤水提物组的表达增加。在LPS刺激的120min中,与对照组相比,LPS 1 μg/mL组Akt的磷酸化水平增加;与LPS 1 μg/mL组相比,红藤水提物1 mg/mL组Akt的磷酸化水平的下调,呈时间依赖性。5.红藤水提物干预的短时间中,Western Blot结果显示,在5 min、15 min、30 min、60 min、120 min中,LPS μg/mL刺激后JNK、P38 MAPK的活化增加,红藤水提物干预后JNK、P38 MAPK磷酸化水平降低。相反的是,红藤水提物干预后ERK1/2的磷酸化水平升高。结论1.初步确立了红藤水提物的HPLC分析方法,测得红藤水提物中的红景天苷1.059 mg/g,芦丁的含量为 0.5611 mg/g。2.红藤水提物显著抑制细胞炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-10的表达,从而抑制炎症反应。3.红藤水提物可以通过NRF2/ARE、Akt/NF-KB和MAPK信号通路来抑制炎症,延缓炎症反应的损害。