禽呼肠孤病毒(ARV)是呼肠孤病毒属的成员。ARV广泛存在于鸡、火鸡及其它禽类。由ARV引起鸡的各种疾病逐渐被认识，如：鸡病毒性关节炎、腱鞘炎、鸡的矮小综合症、呼吸道病、肠道疾病、呼吸障碍综合症和骨质疏松等。ARV感染呈越来越普遍的趋势，尤其对肉鸡饲养业，所造成的损失逐年增加。目前，未见关于治疗ARV感染较好的药物和治疗方法报道。siRNA技术作为一种极具吸引力的治疗策略，现已被广泛应用于抗RNA病毒感染的研究中。　　 RNA干扰(RNA interference，RNAi)，又称RNA沉默，是指双链RNA特异性诱导mRNA降解的过程，是一种转录后基因表达沉默(posttranscripitional gene silence，PTGS)现象。近年来RNAi在疾病治疗领域展现出极大的潜力，特别是抗病毒治疗和抗肿瘤方面。　　 本实验针对禽呼肠孤病毒(ARV)σC基因构建了三个特异性shRNA表达载体（short hairpin RNAs）C1、C2、C3，针对禽呼肠孤病毒(ARV)σNS基因构建了三个特异性shRNA表达载体N1、N2、N3。为评估6个shRNA表达载体的干扰效果，本研究构建了EGFP绿色荧光报告质粒，并建立了Real Time RT-PCR方法定量检测禽呼肠孤病毒σC、σNS和σB基因。　　 为构建荧光报告质粒pEGFP-σC和pEGFP-σNS，PCR扩增ARVS1733株σC、σNS基因，纯化后将二者分别克隆到pEGFP-N1载体中，构建重组质粒pEGFP-σC和pEGFP-σNS。干扰载体和目的基因报告载体共转染鸡胚成纤维细胞的结果表明，6个干扰载体均在不同程度的干扰了目的基因的表达。　　 为评估干扰载体shRNA对病毒复制的影响，建立了SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法检测禽呼肠孤病毒σC、σNS和σB基因。针对σC、σNS和σB基因分别设计了特异性引物，同时选择了l对扩增内参基因β-actin引物，将PCR扩增的的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒，经筛选、鉴定纯化后，梯度倍比稀释作为标准品，用于实时定量荧光PCR中σC、σNS和σB基因及内参基因β-actin标准曲线的构建。转染shRNA干扰质粒的细胞接种ARV，24h后抽提细胞总RNA，用建立的荧光定量RT-PCR方法检测。结果表明，特异性shRNA可以有效抑制ARV体外增殖。