铁硫簇是生物体内存在的最古老的的物质之一,普遍存在于生物体氧化还原系统中,在生物体内起着举足轻重的作用。不同的铁硫蛋白包含不同的铁硫簇,承担着电子传递、氧化还原反应、催化中心、铁和氧的感应器、维持DNA稳定、蛋白质翻译、能量转换等多种功能。铁硫簇种类繁多,最常见的为[2Fe2S]、[3Fe4S]和[4Fe4S]。铁硫簇虽然结构简单,但其组装的过程复杂,包含多种不同的组装途径。目前,在自然界中已经鉴定了四种主要的铁硫生物发生系统,包括NIF（nitrogen fixation）、SUF（sulfur utilization factor）、ISC（iron-sulfur cluster）和CIA（cytosolic iron-sulfur protein assembly）,并对其中所含蛋白质的成分进行了鉴定和表征。然而,铁硫簇组装的详细机制到目前为止还不清晰。我们选择酿酒酵母中的CIA途径作为研究对象,从酿酒酵母BY4741菌种中扩增出CIA途径中靶向复合物的三个基因MMS19、CIA2、CIAl,随后构建重组表达质粒,在大肠杆菌中成功的表达蛋白并经过Ni柱亲和层析、离子交换层析、分子筛层析等纯化步骤得到纯度较高的目的蛋白。通过体外孵育、蛋白交联等方法,我们获取了部分生化性质均一的Mms19、Cia1-Cia2、Mms19-Cia2-Cia1样品,并经过负染电镜制样、冷冻电镜制样检查后收取了部分图片数据。我们得到了Mms19二聚体的蛋白样品,并发现在冷冻制样过程中样品会解聚形成单体,通过收取1300余张冷冻电镜图片,最终我们得到了Mms19单体约8.51（?）的密度图,经初步比对,发现酵母Mms19与小鼠MMS19（PDB:6TC0）从序列到结构上都相当保守。我们在室温下以分子比1:2的比例加入Cia1和Cia2进行孵育,得到了稳定的Cia1-Cia2复合物样品,并在冷冻制样后收取了Cia1-Cia2约2700张冷冻电镜图片,但只得到一类较为清晰的二维分类结果图,不足以重构其三维结构。此外,我们在相同的条件下,以分子比1:2:4的比例孵育Mms19,Cia1,Cia2获得Mms19-Cia2-Cia1复合物,但发现复合物在冷冻制样过程中会解聚。因此我们尝试利用Grafix和溶液交联的方法来稳定复合物。我们发现当使用交联剂BS~3与蛋白以100:1至200:1的比例交联时,得到的复合物较为完整。总之,我们摸索得到了酿酒酵母Mms19、Cia1-Cia2、Mms19-Cia2-Cia1的纯化条件,为后续复合物的纯化、孵育以及结构的解析提供了一定的基础和思路。