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背景美罗华是目前临床上应用最普遍的治疗非霍奇金淋巴瘤的靶向药物之一,无论是单药还是联合治疗,都取得显著的疗效。然而,与众多化疗药物一样,美罗华的长期应用,最终导致肿瘤对其产生耐药性,50%以上的病人出现耐药现象,导致不良预后。而关于美罗华耐药机制的研究目前尚不成熟,PTEN(Phosphatase and tensin homolog)作为一种新的抑癌基因,通过抑制PI3K/AKT信号通路与肿瘤增殖抑制、诱导凋亡、逆转耐药等多方面有着紧密的联系。目的1.通过对比PTEN在美罗华耐药和有效的淋巴瘤组织中的表达情况分析其与美罗华耐药的关系,从而提示PTEN/PI3K/AKT信号通路在美罗华耐药机制中的作用。2.应用PI3K抑制剂作用于美罗华耐药淋巴瘤细胞株和敏感细胞株后,通过对比细胞增殖和凋亡的情况,以及相关靶蛋白的表达情况,从而实现小分子抑制剂对美罗华耐药的逆转作用,反向验证美罗华耐药与PTEN/PI3K/AKT信号通路的相关性。方法1.选取CD20+弥漫大B细胞淋巴瘤患者使用美罗华后复发和有效者的淋巴瘤组织标本分别作为实验组和对照组,免疫组化(IHC)法和原位荧光杂交(FISH)检测肿瘤组织内PTEN的表达情况,分析PTEN与美罗华耐药的关系。2.应用PI3K抑制剂LY294002处理美罗华耐药及敏感的淋巴瘤细胞株后,观察细胞的生长状态,CCK8法和流式细胞术分别检测不同细胞株的增殖和凋亡情况。Western blot法检测PTEN/PI3K/AKT信号通路中相关靶分子的表达情况(如PTEN、PI3K、a-AKT以及BCL-2、caspase3、caspase9等)。结果1.31.3%的患者组织中PTEN的缺失,弥漫大B细胞淋巴瘤组织中PTEN的缺失率与反应性增生性淋巴组织相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。耐药组与有效组PTEN的缺失率相比,差异有统计学意义(P<0.05)。2.经过小分子抑制剂LY294002处理后的耐药细胞株以及稳定高表达PTEN的耐药细胞株均增强了对美罗华的敏感性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.与反应性增生性淋巴组织和对美罗华敏感的淋巴瘤组织相比,PTEN在美罗华耐药弥漫大B细胞淋巴瘤组织中相对低表达,表明PTEN可能与美罗华耐药的机制有关。为进一步探索PTEN/PI3K/AKT信号传导通路与非霍奇金淋巴瘤中美罗华耐药机制的研究提供可靠依据。2.通过小分子抑制剂处理不同细胞株对美罗华耐药的逆转作用,为寻找有效的逆转美罗华耐药的方法提供新的理论依据。